[發明專利]一種海洋雜色曲霉胞外多糖、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202210947634.2
• 申請日: 2022-08-09
• 公開（公告）號: CN115260336B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 張曉勇;陳祁靜;莫麗;黃日明;陳子慧;王毅卓
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02;C12P19/04;C12N1/14;A61K31/715;A61P37/02;C12R1/66
• 代理公司: 廣州文智專利代理事務所(特殊普通合伙) 44469
• 代理人: 丁海燕

1.海洋雜色曲霉胞外多糖AVP141-A在制備調節RAW264.7巨噬細胞免疫活性調節試劑中的應用，其特征在于：所述的海洋雜色曲霉胞外多糖AVP141-A為具有式1所示的結構的多糖：式1，AVP141-A的數均分子量為4082Da。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述海洋雜色曲霉胞外多糖是將海洋雜色曲霉Aspergillus?versicolor?SCAU141接種至發酵液培養基中發酵，得發酵液，對發酵液過濾、濃縮、醇沉、除蛋白、透析、凍干后得粗多糖，粗多糖再經DEAE離子交換柱、G-100凝膠柱層析分離純化，得胞外多糖AVP141-A；

所述海洋雜色曲霉胞外多糖AVP141-A的單糖組成為100%葡萄糖；

所述海洋雜色曲霉胞外多糖AVP141-A的糖苷鍵類型為：[Glcp-(1→]，[→4)-Glcp-(1→]，[→6)-Glcp-(1→]?，和[→4,6)–Glcp-(1→]，且摩爾比為16.93:58.80:7.38:16.89。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述海洋雜色曲霉胞外多糖AVP141-A不含有核酸和蛋白質；

所述海洋雜色曲霉胞外多糖AVP141-A不含有糠醛酸；

所述海洋雜色曲霉胞外多糖AVP141-A的硫酸根含量為3.62%。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的海洋雜色曲霉胞外多糖的制備方法，包括如下步驟：

（1）制備發酵液培養基：發酵培養基組成為：麥芽糖20?g/L、葡萄糖10?g/L、甘露糖20g/L、谷氨酸鈉10?g?/L、七水硫酸鎂0.3?g/L、磷酸二氫鉀0.5?g/L、玉米漿1?g/L、酵母膏3g/L以及海鹽30?g/L，調整發酵培養基pH值為6.8-7.5，滅菌，得發酵液培養基；

（2）接種培養：將海洋雜色曲霉Aspergillus?versicolor?SCAU141孢子接種至步驟（1）所述的發酵液培養基中培養，得發酵液；

（3）除菌體、濃縮：將所述步驟（2）中的發酵液過濾，濾液60℃減壓濃縮，得濃縮液；

（4）醇沉：向步驟（3）所述的濃縮液中加入無水乙醇，4℃靜置，離心收集沉淀，沉淀溶于水，得粗多糖液；

（5）除蛋白：向步驟（4）所述的粗多糖液中加入Savage試劑，搖床震蕩，離心，保留水相，透析，凍干后得粗多糖AVP141；

（6）DEAE離子交換柱分離：用水將步驟（5）所述的粗多糖AVP141配置成10mg/mL溶液，離心，取上清液上樣，以0~2mol/L的NaCl溶液洗脫，收集洗脫液，透析，凍干得到粗多糖AVP141-I；

（7）G-100凝膠柱層析純化：將步驟（6）所述的粗多糖AVP141-I用超純水洗脫，透析，凍干得到粗多糖AVP141-1，使用G-100葡聚糖凝膠分離AVP141-1，收集洗脫液，透析，凍干得到均一組分多糖AVP141-A。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述步驟（2）中接種培養的溫度為26±3℃，培養時間為6-8天。

6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述步驟（3）中濃縮液為原體積1/5-1/4。

7.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述步驟（4）中濃縮液：無水乙醇=1：（4-5），v/v。