[發明專利]一種大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202210937186.8
• 申請日: 2022-08-05
• 公開（公告）號: CN115960843A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發明（設計）人: 趙立寧;明月;鄭果;羅明菊;黃錦爐
• 申請（專利權）人: 廣東海大集團股份有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;C12N15/65;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 林德強

本發明屬于水產養殖疾病防控領域，公開了一種大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株及其制備方法與應用，具體公開了一種大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株，所述大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株為vβHSD基因缺失或敲除的野生型大口黑鱸虹彩病毒株。本發明提供的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除病毒株，該病毒株缺失vβHSD基因，進而降低了親本毒株的毒性，具有良好的安全性能，為未來成功制備大口黑鱸虹彩病毒疫苗提供了理論依據和實踐參考。

技術領域

本發明屬水產養殖疾病防控領域，具體涉及一種大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株及其制備方法與應用。

背景技術

大口黑鱸，又稱加州鱸，是我國重要的經濟養殖魚類，具有養殖周期短、營養價值高、肉質鮮美等特點，深受養殖戶和消費者歡迎。近年來，我國大口黑鱸養殖業發展迅速，養殖產量逐年升高，2020年全國養殖總產量超過60萬噸。

近年來，病毒性爛身病是養殖大口黑鱸中流行性最廣、危害性最大的病害之一，其病原為虹彩病毒科、蛙病毒屬的大口黑鱸虹彩病毒(Largemouth?bass?ranavirus，LMBV)。該病毒的主要流行期在5月至10月的高溫季節，可感染不同規格的大口黑鱸，流行期的發病率可達80％以上，最高死亡率在60％以上，每年對水產養殖業造成了巨大的經濟損失。疫苗作為一種綠色、健康的病害防控手段，在水產病毒病的防治中有著重要的價值。開展大口黑鱸虹彩病毒的疫苗研究，對推進大口黑鱸養殖的健康發展意義重大。

研發發現，蛙病毒主要侵染宿主的單核細胞，且具有較長的潛伏期，活毒疫苗所激發的細胞免疫將發揮重要的免疫作用。目前，關于通過基因缺失構建減毒疫苗株的報道并不少見，如偽狂犬病毒的TK基因缺失株、腫大細胞病毒vSOCS/vTK雙基因敲除株、虎紋蛙病毒vIF2αH基因缺失株等，均能有效地降低病毒的毒力，并能起到有效地免疫保護效果。但是，目前尚沒有關于大口黑鱸虹彩病毒基因缺失株構建的研究，制約著大口黑鱸虹彩病毒減毒疫苗的篩選和研制。

發明內容

本發明第一方面的目的，在于提供一種大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

本發明第二方面的目的，在于提供一種帶有篩選標記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

本發明第三方面的目的，在于提供本發明第一方面的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株的構建方法。

本發明第四方面的目的，在于提供本發明第二方面的帶有篩選標記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株的構建方法。

本發明第五方面的目的，在于提供本發明第一方面的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株或本發明第二方面的帶有篩選標記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株的應用。

本發明第六方面的目的，在于提供一種疫苗。

為了實現上述目的，本發明所采取的技術方案是：

本發明的第一個方面，提供一種大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株，所述大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株為所述大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株為vβHSD基因缺失或敲除的野生型大口黑鱸虹彩病毒株。

優選地，所述vβHSD基因的基因序列為與SEQ?ID?NO:1所示序列具有至少95％同源性的核苷酸序列。

進一步優選地，所述vβHSD基因的基因序列為與SEQ?ID?NO:1所示序列具有至少98％、至少99％或100％同源性的核苷酸序列。

本發明的第二個方面，提供一種帶有篩選標記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株，所述帶有篩選標記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株為vβHSD基因缺失，且在基因缺失的部位通過同源重組插入篩選標記基因的野生型大口黑鱸虹彩病毒株。

優選地，所述篩選標記基因包括綠色熒光蛋白基因和嘌呤霉素基因。