[發(fā)明專(zhuān)利]一種大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株及其制備方法與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210937186.8
• 申請(qǐng)日: 2022-08-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115960843A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙立寧;明月;鄭果;羅明菊;黃錦爐
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東海大集團(tuán)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/01
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/01;C12N15/85;C12N15/65;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 林德強(qiáng)

1.一種大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株，其特征在于，所述大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株為vβHSD基因缺失或敲除的野生型大口黑鱸虹彩病毒株。

2.一種帶有篩選標(biāo)記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株，其特征在于，所述帶有篩選標(biāo)記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株為vβHSD基因缺失，且在基因缺失的部位通過(guò)同源重組插入篩選標(biāo)記基因的野生型大口黑鱸虹彩病毒株。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株，其特征在于，所述篩選標(biāo)記基因包括綠色熒光蛋白基因和嘌呤霉素基因；優(yōu)選地，所述綠色熒光蛋白基因和嘌呤霉素基因通過(guò)T2A序列連接；進(jìn)一步優(yōu)選地，所述篩選標(biāo)記基因的基因序列如SEQ?ID?NO:5所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株，其特征在于，所述vβHSD基因的基因序列為與SEQ?ID?NO:1所示序列具有至少95％同源性的核苷酸序列。

5.權(quán)利要求1所述的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株的構(gòu)建方法。

6.權(quán)利要求2～4中任一項(xiàng)所述的帶有篩選標(biāo)記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株的構(gòu)建方法，包括以下步驟：通過(guò)同源重組的方法將野生型大口黑鱸虹彩病毒株的vβHSD基因進(jìn)行缺失，獲得大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法具體包括以下步驟：

(1)分別擴(kuò)增野生型大口黑鱸虹彩病毒株vβHSD基因的上臂基因和下臂基因；

(2)將步驟(1)的上臂基因和下臂基因分別連接到表達(dá)篩選標(biāo)記基因的表達(dá)盒上，得到同源重組片段；

(3)將步驟(2)的同源重組片段轉(zhuǎn)染鱖腦細(xì)胞，與LMBV病毒液混合孵育，收集病變且存在綠色熒光的細(xì)胞，即得到大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

8.權(quán)利要求1所述的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株或權(quán)利要求2～4中任一項(xiàng)所述的帶有篩選標(biāo)記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株在(a)～(c)中任一項(xiàng)中的應(yīng)用；

(a)提供解析大口黑鱸虹彩病毒蛋白功能的工具；

(b)制備治療或預(yù)防大口黑鱸虹彩病毒疾病的試劑或藥物；

(c)制備診斷大口黑鱸虹彩病毒疾病的試劑。

9.一種疫苗，包含權(quán)利要求1所述的口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株或權(quán)利要求2～4中任一項(xiàng)所述的帶有篩選標(biāo)記的大口黑鱸虹彩病毒vβHSD基因敲除株。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗還包括藥學(xué)上可接受的診斷劑、載劑、賦形劑和稀釋劑中的至少一種。