[發(fā)明專利]中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性基因及其檢測(cè)引物和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210933173.3
• 申請(qǐng)日: 2022-08-04
• 公開（公告）號(hào): CN115717168A
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王瓊;何玉英;任憲云;呂建建;王佳佳;劉萍;李健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 青島合創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發(fā)明公開了中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性基因及其檢測(cè)引物和應(yīng)用。所述特異性基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，用于檢測(cè)的特異性引物的序列為：Female?specific?F：5’?TGGATGCAGCAGGATTAAGGA?3’；Female?specific?R：5’?ACACACCCATCTCTAGCAGG?3’。本發(fā)明利用該特異性引物對(duì)待測(cè)對(duì)蝦的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其擴(kuò)增產(chǎn)物若出現(xiàn)220bp和378bp兩條條帶時(shí)判定為雌性中國(guó)對(duì)蝦，若只出現(xiàn)378bp條帶時(shí)判定為雄性中國(guó)對(duì)蝦。本發(fā)明的特異性引物特異性強(qiáng)，鑒定方法簡(jiǎn)單快速準(zhǔn)確，尤其適合中國(guó)對(duì)蝦早期遺傳性別鑒定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于海洋蝦類性別鑒定技術(shù)，具體涉及中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性基因及其檢測(cè)引物和應(yīng)用。

背景技術(shù)

中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)屬節(jié)肢動(dòng)物門(Arthropoda)、甲殼綱(Crustacea)、十足目(Decapoda)、對(duì)蝦科(Penaeidae)，又稱東方對(duì)蝦，俗稱對(duì)蝦、明蝦，主要分布于黃渤海(包括朝鮮西岸)以及東海北部的嵊泗列島和舟山群島一帶，是我國(guó)最具代表性的海水經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖動(dòng)物之一，并在國(guó)際市場(chǎng)上享有較高的聲譽(yù)。中國(guó)對(duì)蝦屬?gòu)V溫、廣鹽性、一年生暖水性大型洄游蝦類，在黃、渤海區(qū)有明顯的洄游習(xí)性，分為越冬洄游和生殖洄游，其產(chǎn)卵期在4～6月間，懷卵量30～100萬(wàn)粒。近年來(lái)中國(guó)對(duì)蝦的年養(yǎng)殖產(chǎn)量穩(wěn)定在4-5萬(wàn)噸，養(yǎng)殖區(qū)域主要分布在長(zhǎng)江以北的江蘇、山東、天津、河北和遼寧等黃渤海沿岸地區(qū)。

目前，中國(guó)對(duì)蝦主要通過外觀辨別雌雄。性成熟的雌蝦體長(zhǎng)在18cm～23cm，體重60g～80g，呈青綠色；成熟的雄蝦體長(zhǎng)在13cm～17cm，體重30g～40g，呈黃褐色；雌蝦平均體重比雄蝦重一倍以上，因而其市場(chǎng)價(jià)值也大大高于雄性個(gè)體。并且中國(guó)對(duì)蝦上市規(guī)格、等級(jí)的不同，也會(huì)極大地影響?zhàn)B殖經(jīng)濟(jì)效益。因此，建立中國(guó)對(duì)蝦單性育種和養(yǎng)殖技術(shù)，將有助于提高養(yǎng)殖產(chǎn)量，增加漁民收入。但是，中國(guó)對(duì)蝦幼蝦特別是發(fā)育早期的幼體很難通過外觀辨別雌雄，也尚無(wú)通過分子技術(shù)對(duì)中國(guó)對(duì)蝦進(jìn)行性別鑒定的方法，這極大阻礙了其單性育種和養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

研究表明中國(guó)對(duì)蝦性別決定類型為ZW型，即雌性為ZW型，而雄性為ZZ型。中國(guó)對(duì)蝦已發(fā)布的參考基因組是基于雄性個(gè)體進(jìn)行組裝。本發(fā)明根據(jù)雌雄中國(guó)對(duì)蝦重測(cè)序數(shù)據(jù)，組裝了雌性W染色體特異序列，并基于該特異序列開發(fā)了雌性特異性引物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性基因及其檢測(cè)引物和應(yīng)用，其能夠大規(guī)模快速準(zhǔn)確地鑒定生長(zhǎng)各種時(shí)期，尤其是發(fā)育早期的中國(guó)對(duì)蝦的遺傳性別。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明提供了中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

本發(fā)明還提供了中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性引物，用于檢測(cè)所述的中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性基因，其核苷酸序列為：

Female-specific-F：5’-TGGATGCAGCAGGATTAAGGA-3’；

Female-specific-R：5’-ACACACCCATCTCTAGCAGG-3’。

本發(fā)明還提供了一種用于鑒定中國(guó)對(duì)蝦遺傳性別的試劑盒，所述試劑盒中包含權(quán)利要求2所述的中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性引物。

本發(fā)明還提供了所述的中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性引物在鑒定中國(guó)對(duì)蝦遺傳性別中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種鑒定中國(guó)對(duì)蝦遺傳性別的方法，所述方法包括利用所述的中國(guó)對(duì)蝦雌性特異性引物進(jìn)行檢測(cè)的步驟。