[發(fā)明專利]一種用于檢測凝血酶活性及凝血酶抑制劑活性的熒光傳感器及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210931602.3
• 申請日: 2022-08-04
• 公開（公告）號: CN115197994A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王冰;田蔣為;李子怡;喻謝安;王鐵杰;殷果;王玨
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市藥品檢驗研究院（深圳市醫(yī)療器械檢測中心）
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;G01N21/64;C09K11/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

1.一種用于檢測凝血酶活性及凝血酶抑制劑活性的熒光傳感器，其特征在于，所述熒光傳感器包括由聚集誘導(dǎo)發(fā)光探針與凝血酶發(fā)色底物交聯(lián)得到的納米顆粒。

2.如權(quán)利要求1所述的用于檢測凝血酶活性及凝血酶抑制劑活性的熒光傳感器的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：

將聚集誘導(dǎo)發(fā)光探針、凝血酶發(fā)色底物、交聯(lián)劑與溶劑混合，即得。

3.如權(quán)利要求2所述的用于檢測凝血酶活性及凝血酶抑制劑活性的熒光傳感器的制備方法，其特征在于，所述聚集誘導(dǎo)發(fā)光探針與凝血酶發(fā)色底物的濃度比為1:(5-30)，優(yōu)選為1:(12-18)；

優(yōu)選地，所述交聯(lián)劑包括戊二醛；

優(yōu)選地，在所述混合后得到的混合液中，所述交聯(lián)劑的稀釋倍數(shù)為150-400倍，優(yōu)選為300-400倍；

優(yōu)選地，所述溶劑包括有機(jī)溶劑和水，所述有機(jī)溶劑包括四氫呋喃；

優(yōu)選地，在所述混合后得到的混合液中，所述有機(jī)溶劑的稀釋倍數(shù)為15-40倍，優(yōu)選為30-40倍；

優(yōu)選地，所述混合的時間為20-240min，優(yōu)選為20-40min；

優(yōu)選地，所述混合的溫度為15-40℃；

優(yōu)選地，所述混合在攪拌下進(jìn)行，所述攪拌的速度為100-700rpm，優(yōu)選為150-250rpm；

優(yōu)選地，所述混合后還包括避光靜置除去有機(jī)溶劑。

4.如權(quán)利要求1所述的用于檢測凝血酶活性及凝血酶抑制劑活性的熒光傳感器在制備凝血酶活性檢測試劑盒和/或凝血酶抑制劑活性檢測試劑盒中的應(yīng)用。

5.一種凝血酶活性的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括將凝血酶與如權(quán)利要求1所述的用于檢測凝血酶活性及凝血酶抑制劑活性的熒光傳感器混合后，檢測熒光強(qiáng)度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法得到凝血酶活性結(jié)果。

6.如權(quán)利要求5所述的凝血酶活性的檢測方法，其特征在于，所述混合的時間為10-30min；

優(yōu)選地，所述混合的溫度為20-40℃。

7.一種檢測凝血酶抑制劑活性的方法，其特征在于，所述方法包括：測定如權(quán)利要求1所述的用于檢測凝血酶活性及凝血酶抑制劑活性的熒光傳感器的熒光強(qiáng)度，記為A0；將凝血酶與熒光傳感器混合后，檢測熒光強(qiáng)度，記為A1；將待測凝血酶抑制劑、凝血酶與熒光傳感器混合后，檢測熒光強(qiáng)度，記為A2；按照公式B＝(A2-A1)/(A0-A1)×100％計算得到待測凝血酶抑制劑對凝血酶活性的抑制率B。

8.如權(quán)利要求7所述的檢測凝血酶抑制劑活性的方法，其特征在于，所述混合的時間為10-30min；

優(yōu)選地，所述混合的溫度為20-40℃。

9.一種藥物中抗凝血成分的篩選方法，其特征在于，所述篩選方法包括：利用液相色譜分離藥物組分，收集各組分，利用如權(quán)利要求7-8中任一項所述的檢測凝血酶抑制劑活性的方法得到各組分對凝血酶活性的抑制率，將測得的抑制率較高的組分用質(zhì)譜進(jìn)行定性分析，即得藥物中抗凝血成分信息。

10.如權(quán)利要求9所述的藥物中抗凝血成分的篩選方法，其特征在于，所述藥物包括中藥；

優(yōu)選地，所述中藥包括血必凈。