[發明專利]用于動物組織的裂解液及其在CUT＆Tag中的使用方法

在審

• 申請號: 202210931302.5
• 申請日: 2022-08-04
• 公開（公告）號: CN115141876A
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 趙云霞;趙書紅;李新云;付亮亮;郭亞蘋;王道遠;匡仁卓;胡明陽
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C40B50/06;C12Q1/6869
• 代理公司: 深圳國聯專利代理事務所(特殊普通合伙) 44465
• 代理人: 朱嬋姝

本發明公開了用于動物組織的裂解液及其在CUTTag中的使用方法。本發明涉及生物技術和表觀遺傳學技術領域，具體提供了一種適用于動物組織的裂解液及其在CUTTag中的應用方法，該裂解液中含有的適量溫和性非離子去垢劑NP40(或CA630)及Triton X?100，在保障細胞核完整的同時，可高效裂解組織團塊，促進細胞核快速釋放，從而獲得適用于組織CUTTag文庫構建的細胞核，使得在動物組織層面執行CUTTag技術成為可能，在表觀技術研究領域具有較大的應用優勢和較高的商業價值。

技術領域

本發明屬于生物技術和表觀遺傳學技術領域，具體為用于動物組織的裂解液及其在CUTTag中的使用方法。

背景技術

DNA與蛋白質的相互作用，在生命體DNA復制與重組、RNA轉錄、翻譯和修飾過程，以及基因的表達調控中發揮著重要作用，其相互作用幾乎涉及生物體的所有生命活動。隨著2007年，染色質免疫共沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP-seq)首次提出，該技術迅速成為研究人員探究DNA-蛋白質互作的金標準。但ChIP-seq技術對樣品和數據的需要量大，信噪比和分辨率低。且存在甲醛交聯后，引起抗原表位改變等缺陷，從而易造成假陽性結果的出現，制約了其在表觀基因組學領域的進一步發展。CUTRUN(Cleavageunder target and release using nuclease)技術作為一項表觀遺傳學領域重大革新性技術，大大減少了實驗所需的細胞量，能在低測序深度的情況下，得到高信噪比的數據，因此在很大程度上可作為ChIP-seq的代替技術，從而得到了廣泛的應用與發展。但CUTRUN存在成本高、耗時長、工作量大的弊端。2019年，研究人員克服了ChIP-seq和CUTRUN技術的局限性，在CUTRUN基礎上，有效的結合了ATAC-seq技術，從而提出了CUTTag技術。染色質靶向切割和標簽化(CutTag,Cleavage under target and tagment)是利用Protein A/Protein G與經過改造的Tn5轉座子形成融合蛋白，通過Protein A/Protein G與特異性抗體性相互作用，將Protein A/G-Tn5錨定在特異性抗體區域實現高效快速的切割DNA，在靶向切割的同時，利用轉座酶催化雙鏈進行重組交換的特性，在DNA兩端加上外源的擴增接頭序列對DNA進行標記，從而實現快速、高效、高分辨率的微量DAN建庫測序。相較于ChIP-seq和CUTRUN技術而言，CUTTag技術具有實驗周期短，操作簡便，信噪比高，重復性好，細胞投入量低等優點，未來甚至可以實現單細胞層面的檢測。

然而，盡管CUTTag技術在哺乳動物細胞系上的應用較為成熟，但考慮到組織樣本較為稀少，或者組織保存狀態略差的情況下，從動物組織中提取大量完好細胞核仍比較困難，所以該技術在動物組織樣本中的使用方法并不是十分廣泛。鑒于此，本發明提出一種適用于動物組織提取細胞核的裂解液配方及其在動物組織CUTTag中的使用方法，該發明對于探究動物組織樣品中DNA與蛋白質互作信息，對于表觀遺傳學研究，具有重要意義和實用價值。

發明內容

針對上述情況，為彌補上述現有缺陷，本發明提供了用于動物組織的裂解液及其在CUTTag中的使用方法，該裂解液可以有效的解決現有的技術問題，該方法適用性廣，樣品需要量少，實驗耗時短，操作簡便，同時也能適用于保存狀態略差的樣品。

本發明提供如下的技術方案：本發明提出了一種用于動物組織的裂解液，具體由下列重量份數的組分組成：

所述4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)的pH為7.5，所述乙二胺四乙酸的pH為8.0。

本發明提出了一種用于動物組織的裂解液在CUTTag中的使用方法，具體包括下列步驟：

(1)稱取動物組織樣，DPBS重懸清洗組織樣；