[發(fā)明專利]一種檢測(cè)1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失的ELISA檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210928765.6
• 申請(qǐng)日: 2022-08-03
• 公開（公告）號(hào): CN115856295A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬春和;趙敏;黃瑜;程龍飛;傅光華;陳紅梅;傅秋玲;劉榮昌;江南松;施少華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 福州創(chuàng)蔚來知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35290
• 代理人: 鄭艷艷

本發(fā)明提供一種檢測(cè)1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失的ELISA檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用，所述ELISA檢測(cè)試劑盒包括包被有1型鴨圓環(huán)病毒Cap重組蛋白的酶標(biāo)板A以及包被有1型鴨圓環(huán)病毒ORF3重組蛋白的酶標(biāo)板B。本發(fā)明以1型鴨圓環(huán)病毒的Cap蛋白和ORF3蛋白作為包被抗原建立DuCV?1間接ELISA檢測(cè)方法，經(jīng)組合后可用于研究1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失。本發(fā)明的檢測(cè)方法還具有檢測(cè)快速、便捷的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的建立可填補(bǔ)國(guó)內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域空白。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水禽傳染病學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失的ELISA檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

根據(jù)國(guó)際病毒分類委員會(huì)(The International Committee on Taxonomy ofViruses，ICTV)最新分類，圓環(huán)病毒科(Circoviridae)包括兩個(gè)屬(Genus)：圓環(huán)病毒屬(Circovirus)和圓圈病毒屬(Cyclovirus)。目前，圓環(huán)病毒屬包括鸚鵡喙羽病毒(Beak andfeather disease virus，BFDV)、鴨圓環(huán)病毒(Duck circovirus，DuCV)、鵝圓環(huán)病毒(Goosecircovirus，GoCV)、鴿圓環(huán)病毒(Pigeon circovirus，PiCV)、和豬圓環(huán)病毒1型、2型、3型和4型(PCV1、PCV2、PCV3、PCV4)等49個(gè)種(Species)成員(https://talk.ictvonline.org/taxonomy/)。

鴨圓環(huán)病毒(DuCV)最早由Hattermann等2003年首次在德國(guó)番鴨中發(fā)現(xiàn)。DuCV為無囊膜、二十面體對(duì)稱的病毒，其基因組為單股負(fù)鏈環(huán)狀DNA。其基因組編碼兩個(gè)大的蛋白(ORF-V1和ORF-C1)。ORF-V1位于正鏈，編碼DuCV復(fù)制相關(guān)蛋白(Rep)，由292個(gè)氨基酸(aa)構(gòu)成。ORF-C1分布在負(fù)鏈上，編碼DuCV核衣殼蛋白(Cap)，由257aa組成。在編碼區(qū)外還存在2個(gè)與病毒復(fù)制、增殖相關(guān)的基因間區(qū)：一個(gè)基因間區(qū)位于ORF-V1和ORF-C1的5′-端之間的區(qū)域，由2個(gè)反向重復(fù)序列構(gòu)成了一個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)，莖環(huán)上有保守的九堿基(TATTATTAC)序列，在莖環(huán)區(qū)域附近還存在兩個(gè)正向重復(fù)的六堿基序列(GTACTC)。另一個(gè)位于ORF-V1和ORF-C1的3′-端基因間區(qū)的高變異區(qū)域，包含4個(gè)正向重復(fù)序列(CACTTGGGCAG或CACTTGGCAG)。

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。常用的ELISA方法包括間接法、夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法等；其中間接ELISA方法最常用，主要用于血清抗體的檢測(cè)。在DuCV-1基因組中除ORF-V1和ORF-C1兩個(gè)主要ORF之外，新鑒定的位于ORF-V1互補(bǔ)鏈上的第三個(gè)功能性O(shè)RF，命名為ORF3，但ORF3基因缺失突變株的病毒生物學(xué)等尚未見研究。為建立一種可用于研究DuCV-1的ORF3蛋白生物學(xué)功能的方法，本研究將DuCV-1的Cap蛋白和ORF3蛋白分別進(jìn)行表達(dá)，并利用表達(dá)純化后的Cap蛋白和ORF3蛋白結(jié)合建立血清學(xué)檢測(cè)方法，用于區(qū)分1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失的ELISA檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用以及建立一種1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失的ELISA檢測(cè)方法。利用所述ELISA檢測(cè)試劑盒可以對(duì)1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失進(jìn)行區(qū)分。

本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種檢測(cè)1型鴨圓環(huán)病毒ORF3有無缺失的ELISA檢測(cè)試劑盒，它包括包被有1型鴨圓環(huán)病毒Cap重組蛋白的酶標(biāo)板A以及包被有1型鴨圓環(huán)病毒ORF3重組蛋白的酶標(biāo)板B。

所述1型鴨圓環(huán)病毒Cap重組蛋白的制備方法如下：