[發明專利]一種檢測1型鴨圓環病毒ORF3有無缺失的ELISA檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202210928765.6
• 申請日: 2022-08-03
• 公開（公告）號: CN115856295A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 萬春和;趙敏;黃瑜;程龍飛;傅光華;陳紅梅;傅秋玲;劉榮昌;江南松;施少華
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 福州創蔚來知識產權代理有限公司 35290
• 代理人: 鄭艷艷

1.一種檢測1型鴨圓環病毒ORF3有無缺失的ELISA檢測試劑盒，其特征在于：它包括包被有1型鴨圓環病毒Cap重組蛋白的酶標板A以及包被有1型鴨圓環病毒ORF3重組蛋白的酶標板B。

2.根據權利要求1所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述1型鴨圓環病毒Cap重組蛋白的制備方法如下：

對1型鴨圓環病毒的Cap蛋白序列進行分析，經密碼子優化后，得到優化后的1型鴨圓環病毒Cap蛋白氨基酸序列，再將對應的核苷酸序列全基因合成后插入pET30a中，經篩選后獲得陽性重組表達質粒pET30a-DuCV-1-dCap，將重組表達質粒轉化原核表達感受態細胞，并采用IPTG誘導表達，將獲得的表達產物進行純化，即得所述1型鴨圓環病毒Cap重組蛋白，其中，優化后的1型鴨圓環病毒Cap蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根據權利要求1所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述1型鴨圓環病毒ORF3重組蛋白的制備方法如下：

將1型鴨圓環病毒的ORF3基因分析后，全基因合成相關核苷酸序列后，插入pET32a表達載體上，表達的1型鴨圓環病毒ORF3蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，經篩選后獲得陽性重組表達質粒pET32a-DuCV-1-ORF3；將重組表達質粒轉化原核表達感受態細胞，并采用IPTG誘導表達，將獲得的表達產物進行純化，即得所述1型鴨圓環病毒ORF3重組蛋白。

4.根據權利要求1所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述1型鴨圓環病毒Cap重組蛋白的包被濃度為2.00μg/mL，1型鴨圓環病毒ORF3重組蛋白的包被濃度為2.50μg/mL。

5.根據權利要求1所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于：它還包括：

所述的ELISA檢測試劑盒，它還包括：包被液、洗滌液、封閉劑、樣品稀釋液、酶標二抗、顯色劑、終止液、陰性血清、DuCV-1自然感染陽性血清、DuCV-1-△ORF3(ORF3基因缺失DuCV-1)陽性血清。

6.根據權利要求1-5任意一項所述的ELISA檢測試劑盒在檢測1型鴨圓環病毒ORF3有無缺失的應用。