[發明專利]一種臍帶血紅細胞凍存方法

在審

• 申請號: 202210926670.0
• 申請日: 2022-08-03
• 公開（公告）號: CN115386549A
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 薛曉鋒;王迎耀;閔博;袁鴻梅;韋丹;朱學義
• 申請（專利權）人: 河南省遺傳資源細胞庫有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;A01N1/02
• 代理公司: 南京君陶專利商標代理有限公司 32215
• 代理人: 葉立劍

本發明公開了一種臍帶血紅細胞凍存方法，包括臍帶血篩選、標本前處理、沉降并分離紅細胞、凍存、程控降溫、復蘇解凍、紅細胞檢測。本發明的有益效果是：臍帶血資源具有來源豐富、分化潛能大、免疫原性低；6%羥乙基淀粉作為血漿替代品，是臨床上常用的膠體型血漿代用品之一，作為等滲液，能增加血漿容量。臍帶血造血干細胞制備提取過程中加入6%羥乙基淀粉（Hydroxyethyl Starch，HES），凍存液中無需重復添加。

技術領域

本發明涉及一種紅細胞凍存方法 ，具體為一種臍帶血紅細胞凍存方法，屬于細胞生物技術領域。

背景技術

紅細胞在抗腫瘤、抗感染免疫中發揮著重要作用，在成分輸血中占重要的作用，我國醫療臨床用血量約800噸，而且，臨床用血以每年7-10%的速度遞增，臍帶血是臍帶的靜脈血管中流動的血液，是從胎盤絨毛小葉內吸取了各種營養成分的動脈血液，因胎盤內有母體和胎兒兩套血循環，胎兒與母體血液并不直接接觸，臍帶血是胎兒的血液，一般產后或者剖宮產、斷臍后，將臍帶內殘留的血液收集起來，一般量在100ml左右。作為曾經的“醫療廢棄物”，因為含有寶貴的干細胞資源，其價值逐漸被大眾所認識，近年來，更成為醫學生物界研究的熱點領域。

自1974年，科學家Knudtzon首次發現臍帶血中存在造血干細胞以來，臍帶血干細胞治療各種血液病及先天性疾病已在臨床上得到廣泛應用。美國于1992年紐約血液中心(NYBC)建立首家儲存臍帶血干細胞的臍血庫，之后在世界各國陸續建立各自的臍帶血干細胞庫。當前的臍帶血造血干細胞制備分離技術按照紐約臍血庫操作標準，制備分離得到造血干細胞后，血漿和紅細胞留樣到期后，直接作為醫療垃圾處理。

臍帶血造血干細胞制備過程中需事先加入HES，其主要的目的是沉淀分離紅細胞，這給后續紅細胞制劑制備提供了便利：HES作為血容量替代物直接應急輸入人體，輸回人體24h后血漿中85%的HES可在體內自行代謝消除；緊急情況下，減少了大量時間洗滌紅細胞的過程，海藻糖是自然界動植物和微生物中廣泛存在的一種非還原性二糖，具有較高的玻璃化轉變溫度，尤其在干燥過程中能形成穩定的玻璃體，幫助生物體儲存能量，吸收水分，用來對抗冷凍或缺水的極端環境，Dextran是一種非穿透性低溫保護劑，在冷凍過程中可以減少細胞內冰晶的形成，復溫時還可以減輕由于滲透壓改變而引起的細胞腫脹。

發明內容

本發明的目的就在于為了解決上述至少一個技術問題而提供一種臍帶血紅細胞凍存方法。

本發明通過以下技術方案來實現上述目的：一種臍帶血紅細胞凍存方法，包括以下步驟

步驟一、臍帶血篩選：臍帶血來自醫院足月妊娠健康產婦，產前檢查乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、人類免疫缺陷病病毒、巨細胞病毒、EB病毒等均陰性，產婦及家屬對臍帶血用于實驗研究均知情同意；

步驟二、標本前處理：標本表面的消毒處理，目的是去除表面污漬，和可能的細菌進入血液中；

步驟三、沉降并分離紅細胞：臍帶血標本中加入羥乙基淀粉，羥乙基淀粉（HES）可與紅細胞膜上的負電荷結合，使紅細胞凹面相貼體積增大而使得沉降速度加快，利用紅細胞和白細胞的沉降速度的差異來實現分離紅細胞；

步驟四、凍存：將一定比例的凍存液，加入步驟三得到的紅細胞中；

步驟五、程控降溫：將步驟四獲得的紅細胞制劑防止程控降溫盒中，執行程序降溫程序，從室溫降至-80℃，制備成冰凍紅細胞制劑；

步驟六、復蘇解凍：將深低溫保存一定時間的冰凍紅細胞制劑進行快速復溫；

步驟七、紅細胞檢測：將步驟六中復溫的紅細胞制劑進行血紅蛋白（HGB）、紅細胞平均體積（MCV）、紅細胞滲透脆性試驗（RFT）、紅細胞免疫功能檢測。

作為本發明再進一步的方案：所述步驟二中，臍帶血標本先標記，再用熱合機對采集管進行熱合并稱重，將標本采集袋放入84消毒液充分浸泡10-20分鐘，然后用75%酒精擦拭消毒后放置4℃冰箱中，通過傳遞窗傳至凈化車間進行處理。