[發(fā)明專利]一種產(chǎn)生犬冠狀病毒的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及單克隆抗體及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210924338.0
• 申請(qǐng)日: 2022-08-02
• 公開（公告）號(hào): CN115094044B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏振強(qiáng);劉偉;石晶;趙雪;張蕊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)春西諾生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/10;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532;G01N33/543
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 王志新

本發(fā)明提供一種產(chǎn)生犬冠狀病毒的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及單克隆抗體及應(yīng)用，屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。為了提供一種靈敏度高、特異性強(qiáng)的檢測(cè)犬冠狀病毒的方法。本發(fā)明提供一種產(chǎn)生犬冠狀病毒的單克隆抗體的一對(duì)雜交瘤細(xì)胞株，所述一對(duì)雜交瘤細(xì)胞株是雜交瘤細(xì)胞株1B2和3C2，所述雜交瘤細(xì)胞株1B2的保藏號(hào)為CGMCC?No.45200，所述雜交瘤細(xì)胞株3C2的保藏號(hào)為CGMCC?No.45199。本發(fā)明通過單克隆抗體技術(shù)針對(duì)CCV病毒制備了單克隆抗體用雜交瘤細(xì)胞系1B2和3C2，單克隆抗體針對(duì)不同CCV病毒毒株具有較高特異性，制備的膠體金檢測(cè)試紙條靈敏度高，特異性好，從而更準(zhǔn)確快速地檢測(cè)犬冠狀病毒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種產(chǎn)生犬冠狀病毒的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)?胞株及單克隆抗體及應(yīng)用。

背景技術(shù)

犬冠狀病毒(CCV)屬冠狀病毒科冠狀病毒屬，為單股正鏈RNA病毒該病毒形態(tài)特征，?具有類似冠狀的纖突，有囊膜，呈圓形或橢圓形，大小80-120nm。犬冠狀病毒主要有4種結(jié)構(gòu)蛋白分別為纖突蛋白(S，Spike?Protein，180-220kD)是受體結(jié)合位點(diǎn)；小包膜糖蛋白(E，?Envelope?Protein，9–12kD)，此蛋白較小與包膜結(jié)合；跨膜蛋白M蛋白(M，Transmembrane?Protein，29-32kD)負(fù)責(zé)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸和新生病毒出芽釋放與病毒外包膜的形成；核蛋?白N蛋白(N，Nucleocapsid?Protein，50–60kD)與病毒的RNA緊密結(jié)合成病毒的核心殼。

犬冠狀病毒(canine?coronavirus，CCV)是1種嚴(yán)重危害養(yǎng)犬業(yè)、經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)和野生?動(dòng)物保護(hù)的病毒性傳染病病源。犬冠狀病毒可以引起犬類嘔吐、腹瀉、脫水及易復(fù)發(fā)為特性?的高度接觸性傳染病，一年四季均可發(fā)生。該病對(duì)幼犬危害尤其嚴(yán)重，病死率較高。病犬和?帶毒犬是主要傳染源，病毒通過直接接觸和間接接觸，經(jīng)呼吸道和消化道傳染給健康犬及其?他易感動(dòng)物。感染犬可通過糞便排毒2周或更長(zhǎng)時(shí)間，傳染性糞便污染的環(huán)境是傳染的主要?原因。

目前CCV無有效疫苗用于預(yù)防，也無特效療法，因此早期診斷非常重要。CCV的常見臨床癥狀，不易于與其他的腸道病原，如CPV-2，犬輪狀病毒和犬腺病毒區(qū)分。因此CCV?的診斷需要實(shí)驗(yàn)室確診。用于糞便樣品中CCV的檢測(cè)的診斷技術(shù)包括電鏡(EM)，細(xì)胞培養(yǎng)?分離病毒(VI)，病毒基因檢測(cè)(RT-PCR)和膠體金檢測(cè)試紙條等。

在電鏡(EM)，細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒(VI)，病毒基因檢測(cè)(RT-PCR)檢測(cè)方法中，其需要特殊?的設(shè)備與專業(yè)技術(shù)人員，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，成本較高。而膠體金檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈?敏，能穩(wěn)定保存，不需要特殊設(shè)備和熟練的專業(yè)技術(shù)人員，便于獸醫(yī)人員在臨床或田間使用，?成本較低等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了提供一種靈敏度高、特異性強(qiáng)的檢測(cè)犬冠狀病毒的方法。

本發(fā)明提供一種產(chǎn)生犬冠狀病毒的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，所述一種雜交瘤細(xì)胞株?是雜交瘤細(xì)胞株1B2所述雜交瘤細(xì)胞株1B2的保藏號(hào)為CGMCC?No.45200，保藏地址為中?國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏時(shí)間為2022年7月1日或所述一種雜?交瘤細(xì)胞株是雜交瘤細(xì)胞株3C2所述雜交瘤細(xì)胞株3C2的保藏號(hào)為CGMCC?No.45199，保?藏地址為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏時(shí)間為2022年7月1日。

本發(fā)明提供一種犬冠狀病毒的單克隆抗體，所述單克隆抗體為抗體1B2，所述抗體1B2?為雜交瘤細(xì)胞株1B2產(chǎn)生的抗體或所述單克隆抗體為抗體3C2，所述抗體3C2為雜交瘤細(xì)胞?株3C2產(chǎn)生的抗體。