[發明專利]一種產生犬冠狀病毒的單克隆抗體的雜交瘤細胞株及單克隆抗體及應用

有效

• 申請號: 202210924338.0
• 申請日: 2022-08-02
• 公開（公告）號: CN115094044B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 夏振強;劉偉;石晶;趙雪;張蕊
• 申請（專利權）人: 長春西諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532;G01N33/543
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 王志新

1.一種產生犬冠狀病毒的單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于，所述一種雜交瘤細胞株是雜交瘤細胞株1B2，所述雜交瘤細胞株1B2的保藏號為CGMCC?No.45200，保藏地址為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2022年7月1日或所述一種雜交瘤細胞株是雜交瘤細胞株3C2，所述雜交瘤細胞株3C2的保藏號為CGMCC?No.45199，保藏地址為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2022年7月1日。

2.一種犬冠狀病毒的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體為抗體1B2，所述抗體1B2為權利要求1所述的雜交瘤細胞株1B2產生的抗體或所述單克隆抗體為抗體3C2，所述抗體3C2為權利要求1所述的雜交瘤細胞株3C2產生的抗體。

3.一種產生犬冠狀病毒的單克隆抗體的一對雜交瘤細胞株，其特征在于，所述一對雜交瘤細胞株是雜交瘤細胞株1B2和3C2，所述雜交瘤細胞株1B2的保藏號為CGMCC?No.45200，保藏地址為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2022年7月1日；所述雜交瘤細胞株3C2的保藏號為CGMCC?No.45199，保藏地址為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2022年7月1日。

4.一種犬冠狀病毒的一對單克隆抗體，其特征在于，所述一對單克隆抗體為抗體1B2和3C2，所述抗體1B2為權利要求1所述的雜交瘤細胞株1B2產生的抗體；所述抗體3C2是權利要求1所述的雜交瘤細胞株3C2產生的抗體。

5.根據權利要求4所述的抗體對，其特征在于，所述單克隆抗體1B2為標記抗體，所述單克隆抗體3C2為檢測抗體。

6.權利要求1所述的雜交瘤細胞株、權利要求2所述的單克隆抗體、權利要求3所述一對雜交瘤株或權利要求4或5所述的一對單克隆抗體在制備檢測犬冠狀病毒的試劑盒中的應用。

7.一種犬冠狀病毒膠體金檢測試紙條，其特征在于，所述試紙條由如下成分組成：樣品墊、膠體金墊、吸水濾紙、硝酸纖維素膜；所述硝酸纖維素膜上有質控線和檢測線，檢測線上包被權利要求2所述的單克隆抗體3C2，質控線上包被羊抗鼠IgG；所述膠體金墊上包被膠體金標記的權利要求2所述的單克隆抗體1B2。

8.根據權利要求7所述的犬冠狀病毒膠體金檢測試紙條，其特征在于，膠體金標記的單克隆抗體1B2的制備方法：

步驟1：將膠體金溶液進行攪拌，調節pH值至8.5，逐滴緩慢加入犬冠狀病毒單克隆抗體1B2，使犬冠狀病毒單克隆抗體1B2終濃度為20μg/ml，室溫靜置120分鐘；

步驟2：將加入單抗的膠體金溶液中加入10%的BSA溶液使其終濃度為1%，混勻后封閉30分鐘或過夜，7500r/min離心20分鐘，棄上清，用金標緩沖液將離心的沉淀重懸，使其體積為原體積1/10，獲得金標結合物。

9.根據權利要求8所述的犬冠狀病毒膠體金檢測試紙條，其特征在于，步驟1中膠體金溶液的制備方法：0.01%氯金酸溶液加入經硅化處理過的玻璃容器中，置于磁力加熱攪拌器上，煮沸3分鐘后，在攪拌狀態下迅速一次性加入1%檸檬酸三鈉水溶液1.2ml，繼續加熱6～8分鐘，冷卻至室溫后用純化水恢復到100ml，用0.22μm濾膜過濾后裝入潔凈的玻璃瓶中；步驟1中膠體金溶液置于磁力攪拌器上，轉速300g/min攪拌，用0.2mol/L碳酸鉀溶液調節pH值至8.5；步驟2中所述金標緩沖液是由以下成分組成：pH8.5?Tris-HCl、1%?BSA、1%蔗糖和0.5%海藻糖。

10.根據權利要求8所述的犬冠狀病毒膠體金檢測試紙條，其特征在于，每1ml膠體金離心得到的金標結合物加入300μl金標緩沖液，混勻后噴涂在玻璃纖維膜上，噴涂量為25μl/cm²；

將犬冠狀病毒單克隆抗體3C2用膜包被液稀釋后，按照1.0μg/cm噴于硝酸纖維素膜上，作為檢測線；將羊抗鼠IgG按照1.0μg/cm噴于硝酸纖維素膜上，作為質控線。