[發明專利]一種提高軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1表達效率及酶活的方法

在審

• 申請號: 202210922651.0
• 申請日: 2022-08-02
• 公開（公告）號: CN115851560A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 張帆;劉立明;劉浩宇;宋偉;吳靜;齊俊平;劉佳
• 申請（專利權）人: 衢州益康園生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12P19/26;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種產人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1的重組大腸桿菌，其特征在于，將人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1與分子伴侶通過質粒共表達；所述人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；編碼所述分子伴侶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～8任一所示。

2.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，所述質粒包括但不限于pET系列質粒、pRSFDuet系列質粒。

3.根據權利要求1或2所述的重組大腸桿菌，其特征在于，所述重組大腸桿菌的宿主為E.coli Rosetta(DE3)。

4.一種提高重組大腸桿菌胞外人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1產量的方法，其特征在于，將人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1與分子伴侶通過質粒共表達；所述人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；編碼所述分子伴侶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～8任一所示。

5.一種發酵生產人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1的方法，其特征在于，將權利要求1～3任一所述的重組大腸桿菌，在培養基中發酵生產人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述發酵是在TB培養基中發酵。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，利用IPTG誘導所述重組大腸桿菌產人源軟骨素-4-O-磺基轉移酶-1。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述誘導是將所述重組大腸桿菌培養至OD₆₀₀≥0.6。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述誘導是將所述重組大腸桿菌培養至OD₆₀₀≥0.6，用終濃度為25～50mg/L的IPTG在15～35℃誘導。

10.權利要求1所述的重組大腸桿菌或權利要求4～9任一所述的方法在生產硫酸軟骨素或含硫酸軟骨素的產品中的應用。