[發明專利]一種納米抗體熒光親和柱以及利用該親和柱純化HbeAg抗原的方法

在審

• 申請號: 202210922358.4
• 申請日: 2022-08-02
• 公開（公告）號: CN115282934A
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 章瑨;崔春華;李因來
• 申請（專利權）人: 杭州博岳生物技術有限公司
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01D15/22;B01D15/42;C07K14/02;C07K1/22
• 代理公司: 北京精翰專利代理有限公司 11921
• 代理人: 楊曉麗

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種納米抗體熒光親和柱以及利用該親和柱純化HbeAg抗原的方法。所述納米抗體熒光親和柱以瓊脂糖構建基架，在瓊脂糖基架上偶聯有含抗His蛋白的納米抗體，以及熒光基團和/或熒光染料。本發明通過凝膠柱結合特定的含抗His蛋白的納米抗體，能夠實現對目標HbeAg抗原的有效且高效的純化，減少雜質干擾，純化效果優異、純化后檢測精度高。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種納米抗體熒光親和柱以及利用該親和柱純化HbeAg抗原的方法。

背景技術

乙型肝炎E抗原，英文縮寫為HBeAg，是乙肝病毒核心顆粒中的一種可溶性蛋白質。在一般情況下，HBeAg埋藏于HBcAg內部，當HBcAg裂解時，HBeAg從肝細胞核內溶入血清，它的出現遲于HBsAg，而消失卻早于HBsAg，所以是人體感染HBV后跟隨HBsAg出現的第2個血清學抗原標志物。其具有帶His標簽的顯著識別特征。

但現有技術對于純化帶His標簽的蛋白首選都是Ni填料，但用Ni填料純化帶His標簽的蛋白可能會因為蛋白表達折疊過程中His標簽裸露不完全，His標簽結合填料不夠牢固，Ni柱針對His標簽的特異性不夠強，導致蛋白在FT中或在低濃度咪唑中會很容易和雜蛋白一起被洗脫下來，這樣獲得的蛋白純度較低。另外在用咪唑洗脫時，因為咪唑本身在A280也會有一定的背景吸收峰，無法很直觀的判斷洗脫下來的溶液中是否含有目的蛋白。

因而現有的純化效果和效率較差，亟待改進。

發明內容

為解決現有的HbeAg抗原純化效果較差，容易引入雜質導致純度下降等問題，本發明提供了一種納米抗體熒光親和柱以及利用該親和柱純化HbeAg抗原的方法。

本發明的目的在于：

一、提供一種能夠有效用于HbeAg抗原純化的親和柱；

二、提高親和柱的結合特異性和牢固度；

三、能夠有效識別雜質，確保純化效果較佳；

四、能夠有效用于實現HbeAg抗原的純化，并提高純化后的檢測精度。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案

一種納米抗體熒光親和柱，所述納米抗體熒光親和柱以瓊脂糖構建基架，在瓊脂糖基架上偶聯有含抗His蛋白的納米抗體，以及熒光基團和/或熒光染料。

作為優選，

所述納米抗體熒光親和柱采用以下方法進行構建：

通過環氧乙烷基活化方法對瓊脂糖凝膠進行活化處理，并通過環氧預活化填料后，通過巰基與配基偶聯的方式將含抗His蛋白的納米抗體偶聯指經過活化的瓊脂糖凝膠上，通過配基偶聯熒光基團再與填料連接的方式構建形成基架；即得到納米抗體熒光親和柱。

作為優選，

所述含抗His蛋白的納米抗體通過哺乳動物表達系統利用噬菌體展示技術獲取；

所述噬箘體展示技術獲取的具體過程為：

1)細胞復蘇；

2)細胞轉染；

3)對轉染后的細胞進行檢測；

4)細胞計數；

5)離心取上清。

作為優選，

所述熒光基團包括：FAM或TET；

所述熒光染料包括：藻紅蛋白或異硫氰酸熒光素或Gel-Green染料。

作為優選，

所述納米抗體熒光親和柱pH值為4～13。

一種純化HbeAg抗原的方法，

所述方法包括：