[發明專利]一種納米抗體熒光親和柱以及利用該親和柱純化HbeAg抗原的方法

在審

• 申請號: 202210922358.4
• 申請日: 2022-08-02
• 公開（公告）號: CN115282934A
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 章瑨;崔春華;李因來
• 申請（專利權）人: 杭州博岳生物技術有限公司
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01D15/22;B01D15/42;C07K14/02;C07K1/22
• 代理公司: 北京精翰專利代理有限公司 11921
• 代理人: 楊曉麗

1.一種納米抗體熒光親和柱，其特征在于，

所述納米抗體熒光親和柱以瓊脂糖構建基架，在瓊脂糖基架上偶聯有含抗His蛋白的納米抗體，以及熒光基團和/或熒光染料。

2.根據權利要求1所述的一種納米抗體熒光親和柱，其特征在于，

所述納米抗體熒光親和柱采用以下方法進行構建：

通過環氧乙烷基活化方法對瓊脂糖凝膠進行活化處理，并通過環氧預活化填料后，通過巰基與配基偶聯的方式將含抗His蛋白的納米抗體偶聯指經過活化的瓊脂糖凝膠上，通過配基偶聯熒光基團再與填料連接的方式構建形成基架；即得到納米抗體熒光親和柱。

3.根據權利要求1或2所述的一種納米抗體熒光親和柱，其特征在于，

所述含抗His蛋白的納米抗體通過哺乳動物表達系統利用噬菌體展示技術獲取；

所述噬箘體展示技術獲取的具體過程為：

1)細胞復蘇；

2)細胞轉染；

3)對轉染后的細胞進行檢測；

4)細胞計數；

5)離心取上清。

4.根據權利要求1或2所述的一種納米抗體熒光親和柱，其特征在于，

所述熒光基團包括：FAM或TET；

所述熒光染料包括：藻紅蛋白或異硫氰酸熒光素或Gel-Green染料。

5.根據權利要求1或2所述的一種納米抗體熒光親和柱，其特征在于，

所述納米抗體熒光親和柱pH值為4～13。

6.一種純化HbeAg抗原的方法，其特征在于，

所述方法包括：

取表達的HbeAg樣本并將其破碎，取含目的蛋白的上清液，除雜后通過納米抗體熒光親和柱進行上樣，所述上樣流速為1.0mL/min，溫度為2～8℃，上樣結束后洗脫并收集洗脫液，即完成HbeAg抗原純化。

7.根據權利要求6所述的一種純化HbeAg抗原的方法，其特征在于，

所述除雜包括過濾。

8.根據權利要求6所述的一種純化HbeAg抗原的方法，其特征在于，

所述洗脫所用的解離液為2～8mol/L的尿素溶液。

9.根據權利要求6或8所述的一種純化HbeAg抗原的方法，其特征在于，

所述洗脫過程連接核算蛋白檢測儀，至無蛋白檢出即完成洗脫；

所述洗脫過程連接熒光檢測儀，利用熒光檢測儀檢測是否產生配基脫落。

10.根據權利要求6所述的一種純化HbeAg抗原的方法，其特征在于，

所述洗脫液進行蛋白凝膠電泳。