[發明專利]一種實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法

在審

• 申請號: 202210918787.4
• 申請日: 2022-08-02
• 公開（公告）號: CN114958992A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 林思彤;戰大偉;劉剛;羅婧;李萌萌;于杉杉;謝梅迪;高蘭英
• 申請（專利權）人: 斯貝福（北京）生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/6806;C12Q1/14;C12Q1/04;C12R1/445;C12R1/22;C12R1/01;C12R1/385
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本申請涉及實驗動物的技術領域，具體公開了一種實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，具體包括以下步驟：將無菌紗布固定于實驗動物隔離系統的排風口初端以完全覆蓋所述排風口初端；使所述實驗動物隔離系統運行5?10天，以使所述實驗動物隔離系統中環境中的微生物被截留在所述無菌紗布上；隨后取出所述無菌紗布并對所述無菌紗布進行處理，以獲得包含所述微生物核酸的上清液；提取所述上清液中的細菌基因組DNA，并利用PCR擴增進行微生物鑒定。利用本申請提供的檢測方法能夠簡便、快速的檢測實驗動物隔離系統內的易感病原菌微生物；同時能夠提高檢測方法的陽性檢出率，且減少了實驗動物的使用，從而降低了檢測方法的成本。

技術領域

本申請涉及實驗動物的技術領域，具體涉及一種實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法。

背景技術

實驗動物目前主要飼養在隔離系統內，隔離系統采用無菌隔離系統，不與實驗動物直接接觸，進入無菌隔離系統內的所有物品均經過嚴格滅菌或消毒。該隔離系統存在唯一的排風口，隔離系統的進風口和出風口均設置高效過濾器，能夠使得進入設施內的空氣不攜帶任何微生物，同時保證排出的空氣不污染外界環境，該隔離系統適用于飼育無特定病原體動物、悉生動物、無菌動物以及轉基因動物等，這些動物往往較為珍貴。

目前實驗動物隔離系統內微生物的常規檢測方法需要采用活體動物，不符合動物實驗學中3R原則的減少、替代、優化的準則，且檢測過程繁瑣、周期較長，使得檢測方法的成本較高。

發明內容

為了進一步簡便、快速的檢測實驗動物隔離系統內易感病原菌微生物，減少實驗動物的使用，降低檢測方法的成本，本申請提供一種實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法。

一種實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，具體包括以下步驟：

將無菌紗布固定于實驗動物隔離系統的排風口初端以完全覆蓋所述排風口初端；

使所述實驗動物隔離系統運行5-10天，以使所述實驗動物隔離系統中環境中的微生物被截留在所述無菌紗布上；

隨后取出所述無菌紗布并對所述無菌紗布進行處理，以獲得包含所述微生物核酸的上清液；

提取所述上清液中的細菌基因組DNA，并利用PCR擴增進行微生物鑒定。

本申請的隔離系統為實驗動物隔離系統，該隔離系統具有直徑為10cm的管道，該管道是隔離系統中唯一的排風口，排風口末端安裝了高效過濾器。為了檢測隔離系統內的微生物，本申請的技術方案利用螺旋帽將無菌紗布固定在實驗動物隔離系統的排風口初端且完全覆蓋于排風口初端；使該隔離系統運行5-10天，以使實驗動物隔離系統中的環境微生物有效被截留在無菌紗布上；隨后取出無菌紗布并對無菌紗布進行處理，以獲得包含微生物核酸的上清液；然后提取上清液中的細菌基因組DNA，以用于PCR擴增進行微生物鑒定。該技術方案所用原料價格低廉、操作方法簡單，能夠快速的檢測實驗動物隔離系統內易感病原菌微生物，從而降低檢測方法的成本；同時該檢測方法避免了實驗動物的使用，符合3R原則，提高動物福利。

無菌紗布由經、緯紗線一上一下相間交織而成，具有網格交錯排列的特點，能夠起到吸附與攔截微生物的作用。本申請在隔離系統中唯一的排風口初端安裝無菌紗布作為微生物采樣器，隨著空氣的流動與循環，由于擴散作用、重力作用和靜電沉降作用，隔離系統內的微生物能夠有效被吸附或者攔截在無菌紗布上。另外，無菌紗布的網格稀疏，透氣性強，對于隔離系統內的通風效果不會產生不良影響。

在一個具體的實施方案中，所述實驗動物隔離系統的運行時間可以為5天、7天、10天。

在一些具體的實施方案中，所述實驗動物隔離系統的運行時間還可以為5-7天、7-10天。

經過試驗分析可知，當控制實驗動物隔離系統的運行時間在上述范圍內，能夠使得無菌紗布有效采集隔離系統內的微生物，能夠進一步提高溶液中DNA的濃度和純度，從而有利于提高微生物鑒定的靈敏性和準確性。因此，本申請將實驗動物隔離系統的運行時間控制在上述范圍。