[發明專利]一種實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法在審
| 申請號： | 202210918787.4 | 申請日： | 2022-08-02 |
| 公開（公告）號： | CN114958992A | 公開（公告）日： | 2022-08-30 |
| 發明（設計）人： | 林思彤;戰大偉;劉剛;羅婧;李萌萌;于杉杉;謝梅迪;高蘭英 | 申請（專利權）人： | 斯貝福（北京）生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686;C12Q1/6806;C12Q1/14;C12Q1/04;C12R1/445;C12R1/22;C12R1/01;C12R1/385 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 實驗 動物 隔離 系統 微生物 檢測 方法 | ||
1.一種實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
將無菌紗布固定于實驗動物隔離系統的排風口初端以完全覆蓋所述排風口初端；
使所述實驗動物隔離系統運行5-10天，以使所述實驗動物隔離系統中環境中的微生物被截留在所述無菌紗布上；
隨后取出所述無菌紗布并對所述無菌紗布進行處理，以獲得包含微生物核酸的上清液；
提取所述上清液中的細菌基因組DNA，并利用PCR擴增進行微生物鑒定。
2.根據權利要求1所述的實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，所述實驗動物為16±2g的實驗小鼠。
3.根據權利要求2所述的實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，所述實驗小鼠的隔離系統的飼養密度≤20只/m2。
4.根據權利要求2所述的實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，所述實驗小鼠的隔離系統的運行條件為：溫度21±2℃；濕度55±3%；換氣次數30-50次/h。
5.根據權利要求1所述的實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，所述無菌紗布的目數為40-120目。
6.根據權利要求1所述的實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，所述無菌紗布的處理方法為：利用洗液對所述無菌紗布進行洗脫，得到洗脫液；使所述洗脫液經過濾膜過濾，獲得濾液，然后將濾液離心，即得到包含待測微生物核酸的上清液。
7.根據權利要求6所述的實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，所述洗液包括以下重量份的組分：氯化鈉0.6-1.2份；乙醇0.2-0.4份；無菌水90-100份。
8.根據權利要求6所述的實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，所述洗脫的方法為：將所述無菌紗布置于無菌自封袋中，加入所述洗液進行充分混合，在轉速為2000-3000rpm的條件下，渦旋振蕩20-30min，收集洗脫液。
9.根據權利要求1所述的實驗動物隔離系統內微生物的檢測方法，其特征在于，所述細菌基因組DNA的提取方法選自試劑盒提取法或者煮沸模板法提取。
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