[發明專利]一種鑒定白菜苔雜交種“雪銀1573”種子純度的引物及應用

在審

• 申請號: 202210917206.5
• 申請日: 2022-08-01
• 公開（公告）號: CN115927706A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 陰云飛
• 申請（專利權）人: 武漢川禾農業科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 河南豫龍律師事務所 41177
• 代理人: 游國戰

本發明公開了一種用于鑒定白菜苔雜交種“雪銀1573”種子純度的特異性引物，該引物序列為SEQ?ID?No.1subgt;～/subgt;2所示的核苷酸序列。本發明進一步公開了利用上述引物鑒定白菜苔雜交種“雪銀1573”種子純度的方法。本發明提供的特異性引物及方法，在白菜苔雜交種“雪銀1573”種子鑒定中所得到的帶型為雙親的互補帶型，經田間制種結果的驗證，該引物穩定性好，與田間試驗結果吻合，能夠對白菜苔雜交品種“雪銀1573”進行純度鑒定。而且本發明的鑒定方法在3?4h之內即可完成白菜苔雜交種“雪銀1573”種子純度鑒定工作，具有高效率、低成本、操作方便，不受環境影響等優勢，有利于白菜苔雜交種“雪銀1573”種子的質量控制及該品種的進一步推廣。

技術領域

本發明涉及一種鑒定白菜苔雜交種“雪銀1573”種子純度的引物及應用，屬于生物技術領域。

背景技術

菜苔，又名菜心、菜尖和苔心菜等，種類很多，包括有白菜苔、青菜苔(即油菜苔)、臘菜苔、紫菜苔和芥菜苔等。其性涼而味甘，屬性和味道各異，但都是十字花科植物二年生或兩年生草本菜類的花苔及嫩葉。

白菜苔，是小白菜從菜芯里抽出的苔，掐苔的尖部食用，是秋冬期間的重要蔬菜品種之一，全國各地均有栽培，尤其湖南、湖北、安徽、江蘇、浙江、江西等地面積較大。

白菜苔雜交種“雪銀1573”是武漢川禾農業科技有限公司選育的一個早熟白菜苔優良雜交種，適合長江流域秋季種植，具有生育期短、苔性早、抗病性強等特點，抽出的菜苔具有顏色嫩綠、口感甜脆、苔葉小等優點。近年來，該品種的栽培面積不斷擴大，種子需求量也逐年增加。

白菜苔種子的價值較高，種子純度的高低是直接衡量種子質量優劣的主要指標。種子純度降低會顯著降低白菜苔的產量和產品品質，甚至可能造成不可估量的經濟損失。因此，每一批的生產種在出庫之前都應該進行鑒定，嚴把質量關。然而傳統的種子純度鑒定方法是以播種后植株的田間形態觀察為依據，其周期長、工作量大，且易受環境、季節因素影響，導致結果存在偏差。

近年來，隨著現代遺傳學和分子生物學技術的快速發展,基于DNA多態性的分子標記正逐漸成為分析生物遺傳多樣性的有力工具,因其具有不受環境影響、測試周期短、供選擇的標記數量多、可以進行高通量測試分析的優勢,已經大規模用于種子純度鑒定及品種真偽性的鑒定。微衛星(SSR)標記技術具有共顯性、多態性好、重復性好、實驗操作簡單等優點被廣泛應用，是目前作物品種鑒定和種子純度鑒定研究中最常用的標記之一。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種用于鑒定白菜苔雜交種“雪銀1573”種子純度的一對SSR引物及應用，為實現該目的，本發明采用以下技術方案：

一種用于鑒定白菜苔雜交種“雪銀1573”種子純度的一對SSR引物，所述引物核苷酸序列如序列表SEQ?ID?No.1_～2所示。

本發明進一步公開了采用所述引物鑒定白菜苔雜交種“雪銀1573”種子純度的方法，包括以下步驟：

(1)提取白菜苔雜交種“雪銀1573”及親本基因組DNA；

(2)以上述的樣品的基因組DNA為模版，采用如序列表SEQ?ID?No.1_～2所示引物進行PCR擴增，采用的反應體系為：10μL體系，包括：2×Taq?DNA聚合酶Mix?5μL，上游和下游引物10μmol/L各0.5μL，供試白菜苔雜交種基因組DNA模板(50ng/μL)1μL，雙蒸水補足10μL；

采用的擴增程序為：94℃預變性4min，35個擴增循環(94℃45sec，55℃30sec，72℃45sec)；72℃延伸5min，4℃保存；

(3)PCR擴增產物鑒定：將上述的擴增獲得的產物經10％聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,銀染法染色,待測樣品PCR擴增產物的電泳條帶同時含有父本材料擴增產物的條帶和母本材料擴增產物的條帶，為白菜苔雜交種“雪銀1573”種子；