[發明專利]一種胃間質瘤類器官培養基及培養方法

有效

• 申請號: 202210906986.3
• 申請日: 2022-07-29
• 公開（公告）號: CN115181730B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 蘭堅強;朱宇;宋志文;井建玲;黃敏
• 申請（專利權）人: 創芯國際生物科技（廣州）有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071
• 代理公司: 廣州容大知識產權代理事務所(普通合伙) 44326
• 代理人: 趙嬛嬛

本發明涉及一種胃間質瘤類器官培養基及培養方法，包括基礎細胞因子、特異性細胞因子、抑制劑、原代細胞抗生素和基質膠；按照終濃度組成，所述基礎細胞因子包括：10?100ng/ml的EGF，20?500ng/ml的Noggin，20?500ng/ml的R?spondin?1，20?500ng/ml的Wnt3a；所述特異性細胞因子包括1?50ng/ml的SCF，10?200ng/ml的IGF?1，1?50ng/ml的CCBE1，所述原代細胞抗生素濃度為100ug/ml；所述基質膠為體積濃度為1％的Matrigel，以上成分均溶于DMEM/F12培養基中。本發明培養基可以成功培養出胃間質瘤類器官，該類器官可以用于后續的藥敏實驗，可用于胃間質瘤組織的生理病理研究以及后續的基因治療，為再生醫學提供穩定的類器官研究材料。

技術領域

本發明涉及類器官培養技術領域，尤其是涉及一種胃間質瘤類器官培養基及培養方法。

背景技術

胃間質瘤是消化道最常見的具有多向分化潛能的間葉組織源性腫瘤，是臨床上較為常見的具有潛在惡性的消化系統腫瘤，其發病原因目前尚不十分清楚，認為可能與生活環境及其經常食用霉變、腌制、熏烤食物或食鹽過多等飲食習慣有關，與遺傳因素也有關系。在早期，腫瘤體積較小時無明顯癥狀。伴隨著瘤體的不斷增大，可能導致胃部潰瘍發生，病人可能會出現包括腹脹、腹痛、黑便和貧血的臨床癥狀，但這些癥狀無特異性，不容易與其他疾病相鑒別，且直徑小于2cm的胃小間質瘤一般無任何臨床癥狀。

胃間質瘤的良惡性，常常與病變的大小密切相關，大多數小的間質瘤是良性的，僅僅表現為非常緩慢的生長，不會引發不適，也不會危及患者的生命健康。而大的間質瘤常常惡性程度高，容易轉移復發。但大的間質瘤也是由小的間質瘤逐漸長大發展而來的，極少數小間質瘤在生長過程中會逐漸出現惡性腫瘤的特征，而且何時發生突變也難以預料，惡變時表現為快速生長，到后期合并潰瘍、出血，甚至出現遠處轉移，危及生命。因此，研究其結構與功能將有助于幫助我們了解胃間質瘤的發病機制，從而為疾病的預防、控制和診療奠定堅實的基礎。

類器官(Organoids)是衍生于干細胞或前體細胞的器官特異性細胞集合。體外培養的類器官在細胞成分和組織架構上與對應器官高度相似，并具備相應的功能學特征。與常規細胞培養在二維環境中培養單一細胞類群不同，類器官培養是在三維環境中培養出特定組織器官包含的多種細胞類群，其培養體系與體內微環境更為相似。因此，在各種器官生理病理的基礎研究、精準醫療、藥物篩選和開發、基因治療、再生醫學等方面，顯示出巨大的應用前景。

雖然多種人源其他組織如肝臟、腸等使用不同的方法、不同的培養條件下可在體外成功培養成功為類器官，但是由于胃間質瘤的發生率相對來說比較罕見，因此，目前還沒有關于胃間質瘤類器官的培養方法的研究及報道。

發明內容

有鑒于此，有必要針對上述問題，提供一種胃間質瘤類器官培養基及培養方法。

為了解決現有技術存在的問題，本發明采用的技術方案如下：

第一方面，本發明提供一種胃間質瘤類器官培養基，包括基礎細胞因子、特異性細胞因子、抑制劑、原代細胞抗生素和基質膠；按照終濃度組成，所述基礎細胞因子包括：10-100ng/ml的EGF，20-500ng/ml的Noggin，20-500ng/ml的R-spondin?1，20-500ng/ml的Wnt3a；所述特異性細胞因子包括1-50ng/ml的SCF，10-200ng/ml的IGF-1，1-50ng/ml的CCBE1，所述原代細胞抗生素濃度為100ug/ml；所述基質膠為體積濃度為1％的Matrigel，以上成分均溶于DMEM/F12培養基中。

進一步地，按照終濃度組成，所述抑制劑包括：100-2000nM的CHIR99021，1-40μM的A83-01，2-50μM的Y-27632dihydrochloride，以上成分均溶于DMEM/F12培養基中。