[發(fā)明專利]一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210906986.3
• 申請(qǐng)日: 2022-07-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115181730B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘭堅(jiān)強(qiáng);朱宇;宋志文;井建玲;黃敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 創(chuàng)芯國(guó)際生物科技（廣州）有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C12N5/071
• 代理公司: 廣州容大知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44326
• 代理人: 趙嬛嬛

1.一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)基，其特征在于：是由基礎(chǔ)細(xì)胞因子、特異性細(xì)胞因子、抑制劑、原代細(xì)胞抗生素和基質(zhì)膠組成；按照終濃度組成，所述基礎(chǔ)細(xì)胞因子組成是：10-100ng/ml的EGF，20-500ng/ml的Noggin，20-500ng/ml的R-spondin?1，20-500ng/ml的Wnt3a；所述特異性細(xì)胞因子組成是1-50ng/ml的SCF，10-200ng/ml的IGF-1，1-50ng/ml的CCBE1，所述抑制劑組成是：100-2000nM的CHIR99021，1-40μM的A83-01，2-50μM的Y-27632

dihydrochloride，所述原代細(xì)胞抗生素濃度為100ug/ml；所述基質(zhì)膠為體積濃度為1％的Matrigel，以上成分均溶于DMEM/F12培養(yǎng)基中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)基，其特征在于，按照終濃度組成，所述基礎(chǔ)細(xì)胞因子組成是：10ng/ml的EGF，20ng/ml的Noggin，20ng/ml的R-spondin?1，20ng/ml的Wnt3a；所述特異性細(xì)胞因子組成是1ng/ml的SCF，10ng/ml的IGF-1，50ng/ml的CCBE1，所述原代細(xì)胞抗生素濃度為100ug/ml；所述基質(zhì)膠為體積濃度為1％的Matrigel，所述抑制劑組成是：100nM的CHIR99021，1μM的A83-01，50μM的Y-27632dihydrochloride，以上成分均溶于DMEM/F12培養(yǎng)基中。

3.一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)方法，其特征在于：包括以下步驟：

①將新鮮來(lái)源的手術(shù)切除標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理，得到細(xì)胞數(shù)量為3-50個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)后，離心去除上清，收集細(xì)胞沉淀備用；

②取適量權(quán)利要求1所述的胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)基，重懸步驟①獲得的細(xì)胞沉淀，得到細(xì)胞懸液；

③將步驟②獲得的細(xì)胞懸液滴加到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，在轉(zhuǎn)速為20-200rpm，溫度為37℃，CO₂濃度為5％的環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)；

④每隔2-3天更換一次權(quán)利要求1所述的胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)基，培養(yǎng)4-7天后，得到胃間質(zhì)瘤類器官。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟①的預(yù)處理步驟包括：將標(biāo)本經(jīng)過(guò)多次生理鹽水洗滌后切碎，加入消化液，直至將標(biāo)本消化成大部分為3-50個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)后，加入HBSS緩沖液稀釋并濾除殘?jiān)碗s質(zhì)。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟②中是按每1-10×10⁵細(xì)胞使用2ml培養(yǎng)基重懸步驟①獲得的細(xì)胞沉淀。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟②中是按每2×10⁵細(xì)胞使用2ml培養(yǎng)基重懸步驟①獲得的細(xì)胞沉淀。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟③中是將細(xì)胞培養(yǎng)裝置置于搖床上。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)方法，其特征在于：所述搖床轉(zhuǎn)速為100rpm。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種胃間質(zhì)瘤類器官培養(yǎng)方法，其特征在于：所述細(xì)胞培養(yǎng)裝置是30mm超低粘附培養(yǎng)皿。