[發明專利]一種皮膚干細胞制備方法有效
| 申請號： | 202210906273.7 | 申請日： | 2022-07-29 |
| 公開（公告）號： | CN115141795B | 公開（公告）日： | 2023-05-23 |
| 發明（設計）人： | 胡波潯;劉贏瀅;謝亮;趙傳鑫;李欣;謝元進;姜舒;張蕓 | 申請（專利權）人： | 深圳市茵冠生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/074 | 分類號： | C12N5/074 |
| 代理公司： | 廣東省中源正拓專利代理事務所(普通合伙) 44748 | 代理人： | 黨沖 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市光明區鳳凰街道塘尾*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 皮膚 干細胞 制備 方法 | ||
1.一種皮膚干細胞制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)預處理：取皮膚組織進行清洗消毒，然后剪碎成組織勻漿塊，離心后棄上清得到真皮組織；
(2)消化：使用完全培養基和1％膠原蛋白酶IV對真皮組織進行消化；
(3)原代培養：真皮組織消化12～36h后用DPBS清洗并離心收集細胞，用完全培養基進行原代細胞培養，待細胞匯合度達到80％以上時消化并過濾組織塊，得到細胞懸液；
(4)傳代培養：細胞懸液用DPBS離心后進行細胞傳代培養，待細胞匯合度達到85％以上時消化并離心得到皮膚干細胞；
步驟(2)和步驟(3)所述完全培養基包括基礎培養基和胎牛血清、甲殼素、維生素E、肌醇六磷酸；
所述完全培養基中基礎培養基、胎牛血清、甲殼素、維生素E和肌醇六磷酸的比例為：1ml:0.02～0.04ml:20～50ug:25～65ug:8～18ug；
步驟(2)所述消化條件為在37℃溫度下5％CO2培養箱中，放置12～36h；
步驟(3)所述原代培養具體方法為：真皮組織消化12～36h后用DPBS清洗并離心收集細胞，用完全培養基進行原代細胞培養6～10天，待細胞匯合度達到80％以上時用0.125％胰蛋白酶消化液消化并過濾組織塊，得到細胞懸液。
2.根據權利要求1所述的一種皮膚干細胞制備方法，其特征在于，步驟(1)所述清洗消毒是指先后用1％青鏈霉素和0.9％氯化鈉注射液進行浸泡清洗消毒。
3.根據權利要求1所述的一種皮膚干細胞制備方法，其特征在于，步驟(3)所述過濾組織塊是指通過100μm細胞篩網過濾掉組織塊，得到細胞懸液。
4.根據權利要求1所述的一種皮膚干細胞制備方法，其特征在于，步驟(4)所述消化用的消化液為0.125％胰蛋白酶消化液。
5.根據權利要求1所述的一種皮膚干細胞制備方法，其特征在于，步驟(4)所述消化完成的指標為：顯微鏡下觀察消化情況，細胞大部分由梭形變為圓形，快速拍打培養瓶側壁，直到大部分的細胞脫落。
6.根據權利要求1所述的一種皮膚干細胞制備方法，其特征在于，步驟(4)所述傳代培養是指傳代至P2代。
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