[發明專利]雞血藤瞬時轉化方法及應用在審
| 申請號： | 202210906155.6 | 申請日： | 2022-07-29 |
| 公開（公告）號： | CN116004709A | 公開（公告）日： | 2023-04-25 |
| 發明（設計）人： | 秦雙雙;林泉;謝月英;韋桂麗;繆劍華 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區藥用植物園 |
| 主分類號： | C12N15/84 | 分類號： | C12N15/84;A01H5/00;A01H6/54 |
| 代理公司： | 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369 | 代理人： | 李開成 |
| 地址： | 530023 廣西壯*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 雞血藤 瞬時 轉化 方法 應用 | ||
1.雞血藤瞬時轉化方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)構建表達載體質粒；
2)將表達載體質粒轉入根癌農桿菌感受態細胞中，并利用菌液侵染雞血藤盛花期花瓣；
3)將浸染后的雞血藤花進行遮光處理，過夜培養12-24h，即完成雞血藤的瞬時轉化。
2.根據權利要求1所述的雞血藤瞬時轉化方法，其特征在于，所述表達載體為過表達載體，將雞血藤基因SsMYB106與質粒pBI121載體連接，構建過表達載體質粒pBI121-SsMYB106；雞血藤基因SsMYB106如SEQ?ID?NO.1所示。
3.根據權利要求1所述的雞血藤瞬時轉化方法，其特征在于，步驟1)中，過表達載體質粒攜帶有CaMV35S啟動子、Kanamycin載體抗性及報告基因。
4.根據權利要求3所述的雞血藤瞬時轉化方法，其特征在于，所述報告基因為β-Glucuronidase、熒光素酶、熒光蛋白中的任意一種。
5.根據權利要求1所述的雞血藤瞬時轉化方法，其特征在于，步驟2)中，通過液氮凍融法將過表達載體質粒轉入根癌農桿菌GV3101感受態細胞，經菌落PCR鑒定無誤，侵染雞血藤盛花期花瓣。
6.根據權利要求1所述的雞血藤瞬時轉化方法，其特征在于，步驟2)中，用無菌注射器在花瓣背面輕輕摩擦出細微傷口，使用無針頭的無菌注射器將菌液于傷口處緩慢注入菌液，在花瓣兩邊分別進行注射，使注射后的花瓣呈半透明狀。
7.如權利要求1-6任意所述雞血藤瞬時轉化方法在研究目的基因調控雞血藤活性成分合成中的應用。
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