[發(fā)明專利]一種芹菜根腐病菌的接種方法

在審

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• 申請日: 2022-07-28
• 公開（公告）號: CN115386620A
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發(fā)明（設計）人: 高葦;王勇;楊利娟;張春祥;高國訓;吳鋒;賁海燕;姚玉榮;劉曉琳
• 申請（專利權）人: 天津市農業(yè)科學院
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;C12R1/77
• 代理公司: 北京盛凡佳華專利代理事務所(普通合伙) 11947
• 代理人: 張歡

本發(fā)明公開了一種芹菜根腐病菌的接種方法，包括如下步驟：(1)準備試驗芹菜苗；(2)芹菜根腐病菌的培養(yǎng)；(3)病原菌孢子懸浮液制備；(4)芹菜水培處理；(5)發(fā)病情況調查。針對目前芹菜根腐病接種方法中存在發(fā)病時間長、癥狀難以判斷的問題，本發(fā)明提供一種芹菜根腐病菌的接種方法，該方法操作簡便、準確率高、可快速評價病原菌與芹菜間的互作關系，為其病原菌致病力的鑒定、殺菌劑活性篩選及芹菜種質資源的抗病性評價提供技術支持。

技術領域

本發(fā)明屬于芹菜根腐病防治技術領域，更具體的說是涉及一種芹菜根腐病菌的接種方法。

背景技術

近年來，芹菜的種植面積不斷擴大，成為我國主要栽培蔬菜品種之一。芹菜連作重茬的現象越來越多，芹菜根腐病的發(fā)生逐年加重，導致減產絕收，成為危害芹菜產業(yè)發(fā)展的重要問題。芹菜根腐病發(fā)病初期在莖基部出現水浸狀、褐色病癥，植株上部枝葉萎蔫、變黃，后期莖基部縊縮、干枯，最終導致芹菜整棵死亡，主根紅褐色腐爛。目前報道芹菜成株期根腐病病原菌主要為鐮刀菌(Fusarium sp.)，研究顯示茄病鐮刀菌(Fusarium solani)是芹菜根腐病的主要致病菌。

芹菜根腐病是芹菜生長中主要發(fā)生的病害，芹菜根腐病的防治以化學防治為主，但傳統(tǒng)的殺菌劑極易產生抗藥性，防治效果低。高效低毒殺菌劑的篩選、及復配配方優(yōu)化對芹菜根腐病的防治具有重要意義。另外，推廣應用抗病品種是解決芹菜根腐病危害最直接有效的方法。但目前抗病種質資源缺乏，還沒有商業(yè)化的芹菜根腐病抗病品種，因此開展芹菜根腐病抗病資源篩選和評價具有重要的意義。鑒此，準確有效的抗病性鑒定方法的建立是抗病資源挖掘利用、品種選育、抗性評價等研究工作的基礎。

在芹菜根腐病接種方法的研究報道中發(fā)現，接種后芹菜發(fā)病時間長、發(fā)病癥狀不明顯、難于判斷弊端，而且接種后通常需要拔掉芹菜，調查根部病情分級，因此為芹菜根腐病致病力鑒定、殺菌劑防效測定及抗性種質資源篩選等造成一定的困難。

因此，如何提供一種芹菜根腐病菌的接種方法成為了本領域技術人員亟需解決的問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于針對目前芹菜根腐病接種方法中存在發(fā)病時間長、癥狀難以判斷的問題，本發(fā)明提供一種芹菜根腐病菌的接種方法，該方法操作簡便、準確率高、可快速評價病原菌與芹菜間的互作關系，為其病原菌致病力的鑒定、殺菌劑活性篩選及芹菜種質資源的抗病性評價提供技術支持。

為了實現上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：

一種芹菜根腐病菌的接種方法，包括如下步驟：(1)準備試驗芹菜苗；(2)芹菜根腐病菌的培養(yǎng)；(3)病原菌孢子懸浮液制備；(4)芹菜水培處理；(5)發(fā)病情況調查。

進一步的，步驟(1)中，采用滅菌育苗基質進行育苗，育苗基質為草炭和蛭石(體積份數比為2:1)混勻后，121℃蒸汽滅菌30min；將芹菜種子播種于裝有育苗基質的育苗盤內，按常規(guī)育苗方法管理，60d后，芹菜長出4片真葉，挑選健康、長勢一致的幼苗待用。

進一步的，步驟(2)中，芹菜根腐菌培養(yǎng)的具體操作為：芹菜根腐病原接種PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，26℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)7d，然后用打孔器(直徑4mm)在菌落邊緣菌絲處打孔，獲得菌片接種于PD液體培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基接種5片菌碟；將其置于振蕩培養(yǎng)箱中26℃，120rpm/min振蕩培養(yǎng)7d。

進一步的，步驟(3)中，病原菌孢子懸浮液制備具體操作為：將在PD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)好根腐病菌培養(yǎng)液雙層紗布過濾，去除菌絲體，回收濾液，5000rpm/min，離心30min后，棄上清液，取沉淀物加入適量的蒸餾水，再用血球計數板將菌懸液調配成濃度為1×10⁵～10⁶個孢子/mL的孢子懸浮液，接種備用。