[發(fā)明專利]一種芹菜根腐病菌的接種方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210901642.3
• 申請(qǐng)日: 2022-07-28
• 公開（公告）號(hào): CN115386620A
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高葦;王勇;楊利娟;張春祥;高國訓(xùn);吳鋒;賁海燕;姚玉榮;劉曉琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/24
• 分類號(hào): C12Q1/24;C12R1/77
• 代理公司: 北京盛凡佳華專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11947
• 代理人: 張歡

1.一種芹菜根腐病菌的接種方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)準(zhǔn)備試驗(yàn)芹菜苗；(2)芹菜根腐病菌的培養(yǎng)；(3)病原菌孢子懸浮液制備；(4)芹菜水培處理；(5)發(fā)病情況調(diào)查。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芹菜根腐病菌的接種方法，其特征在于，步驟(1)中，采用滅菌育苗基質(zhì)進(jìn)行育苗，育苗基質(zhì)為草炭和蛭石混勻后，121℃蒸汽滅菌30min；將芹菜種子播種于裝有育苗基質(zhì)的育苗盤內(nèi)，按常規(guī)育苗方法管理，60d后，芹菜長(zhǎng)出4片真葉，挑選健康、長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗待用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種芹菜根腐病菌的接種方法，其特征在于，步驟(2)中，芹菜根腐菌培養(yǎng)的具體操作為：芹菜根腐病原接種PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，26℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)7d，然后用打孔器在菌落邊緣菌絲處打孔，獲得菌片接種于PD液體培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基接種5片菌碟；將其置于振蕩培養(yǎng)箱中26℃，120rpm/min振蕩培養(yǎng)7d。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種芹菜根腐病菌的接種方法，其特征在于，步驟(3)中，病原菌孢子懸浮液制備具體操作為：將在PD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)好根腐病菌培養(yǎng)液雙層紗布過濾，去除菌絲體，回收濾液，5000rpm/min，離心30min后，棄上清液，取沉淀物加入適量的蒸餾水，再用血球計(jì)數(shù)板將菌懸液調(diào)配成濃度為1×10⁵～10⁶個(gè)孢子/mL的孢子懸浮液，接種備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種芹菜根腐病菌的接種方法，其特征在于，步驟(4)中，芹菜水培處理的具體操作為：將步驟(1)中挑選的健康、長(zhǎng)勢(shì)一致的芹菜苗從育苗基質(zhì)中取出，清洗去除根部基質(zhì)，然后將其放入步驟(3)中配好的芹菜根腐菌孢子懸浮液中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件23～28℃，光照12h，濕度不超過70％。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種芹菜根腐病菌的接種方法，其特征在于，步驟(5)中，發(fā)病情況調(diào)查的具體操作為：每天觀察水培芹菜生長(zhǎng)狀況和發(fā)病情況；按芹菜根腐病水培接種病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，5～7d對(duì)植株發(fā)病程度進(jìn)行調(diào)查，并計(jì)算病情指數(shù)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種芹菜根腐病菌的接種方法，其特征在于，步驟(5)中，芹菜根腐病水培接種病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：0級(jí)，無癥狀；1級(jí)，根絮狀，無新根，須根變細(xì)，植株無顯著變化；2級(jí)，植株莖基部萎蔫，主根變細(xì)，根部變褐，易斷；3級(jí)，葉片萎蔫黃化，莖部縊縮；4級(jí)，整株植株萎蔫至死。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種芹菜根腐病菌的接種方法，其特征在于，步驟(5)中，病情指數(shù)計(jì)算公式為：病情指數(shù)＝Σ(發(fā)病葉數(shù)×相應(yīng)病級(jí)數(shù))×100/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×4)。