[發明專利]基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物及其制備方法

在審

• 申請號: 202210901074.7
• 申請日: 2022-07-28
• 公開（公告）號: CN115990247A
• 公開（公告）日: 2023-04-21
• 發明（設計）人: 張楠;陳義兵;孫俊紅;董卓林;李夢茹
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K47/28;A61K47/26;A61P35/00;A61K31/704;A61K33/38
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 冉珊敏

1.基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物，其特征在于：所述免疫化療藥物包括DNA立方體、位于DNA立方體相對面的膽固醇分子、腫瘤抗原分子及化療藥物。

2.?根據權利要求1所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物，其特征在于：所述DNA立方體由DNA鏈1AB、2BA、3AB、4BA和Cholesterol-A20自組裝制備得到；其中1AB的堿基序列如SEQ?ID?No.1所示，2BA的堿基序列如SEQ?ID?No.2所示，3AB的堿基序列如SEQID?No.3所示，4BA的堿基序列如SEQ?ID?No.4所示；Cholesterol-A20的堿基序列如SEQ?IDNo.5所示，其5’端修飾有膽固醇。

3.根據權利要求2所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物，其特征在于：所述腫瘤抗原分子為含有表位的抗原肽、蛋白或多糖，其左端修飾有含有巰基的半胱氨酸。

4.?根據權利要求3所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物，其特征在于：所述腫瘤抗原分子與短鏈B14經交聯劑sulfo-SMCC連接后再與DNA立方體相連，其中短鏈B14的堿基序列如SEQ?ID?No.6所示，其5’端修飾有氨基。

5.根據權利要求4所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物，其特征在于：所述化療藥物均勻嵌入在DNA立方體的堿基對之間。

6.權利要求2-5任一項所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物的制備方法，其特征在于，步驟為：

（1）將DNA鏈1AB、2BA、3AB、4BA與Cholesterol-A20按比例混合，經程序降溫后，得DNA立方體；

（2）將NH₂-短鏈B14與交聯劑sulfo-SMCC恒溫震蕩反應，經超濾除去多余交聯劑后所得產物，再與經巰基修飾的腫瘤抗原分子震蕩反應，經超濾除去多余的腫瘤抗原分子，即得B14-腫瘤抗原分子；

（3）將步驟（1）的DNA立方體與步驟（2）的B14-腫瘤抗原分子混勻后進行升溫-降溫循環反應，得DNA立方體-腫瘤抗原分子；

（4）將步驟（3）的DNA立方體-腫瘤抗原分子與化療藥物常溫孵育后，經離心棄上清，得化療藥物@DNA立方體-腫瘤抗原分子。

7.根據權利要求6所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中DNA鏈1AB、2BA、3AB、4BA與Cholesterol-A20的物質的量比為1:1:1:1:8；程序降溫的條件為：95℃保持5分鐘，然后經30分鐘勻速降溫至80℃并保持5分鐘，再以2分鐘/1℃的速度降溫至40℃，最后以3分鐘/1℃的速度降溫到4℃。

8.?根據權利要求6所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中NH₂-短鏈B14的濃度為100?μM?，交聯劑sulfo-SMCC的濃度為10?mM，恒溫震蕩反應的溫度為25℃，時間為2小時；所得產物與腫瘤抗原分子震蕩反應的溫度為25℃，時間為8小時。

9.根據權利要求6所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物的制備方法，其特征在于：所述步驟（3）中DNA立方體與B14-腫瘤抗原分子的物質的量比為1:8，升溫-降溫循環反應的條件為以升溫至40℃然后30分鐘內勻速降溫至4℃為單次循環，共循環進行4次。

10.?根據權利要求6所述的基于重塑腫瘤細胞免疫原性策略的免疫化療藥物的制備方法，其特征在于：所述步驟（4）中DNA立方體-腫瘤抗原分子與化療藥物的摩爾比為1:1400，在恒溫混勻儀中?25℃、1000?rpm孵育3小時。