[發明專利]牛結節性皮膚病病毒ELISA抗體檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202210901011.1
• 申請日: 2022-07-28
• 公開（公告）號: CN115993449A
• 公開（公告）日: 2023-04-21
• 發明（設計）人: 李靜;張蕾;董春娜;石守定;李鵬宇;肖進;巴利民;劉新月;鄭妍妍;劉鵬;齊鵬
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/58;C07K14/065
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

1.牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽組合物，為序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽、序列表中序列3所示的多肽和序列表中序列4所示的多肽中的一種或兩種以上的任意組合。

2.根據權利要求1所述牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽組合物，其特征在于：當所述多肽組合物為序列1所示的多肽、以及序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽中的任意兩種時，兩種多肽的質量比為(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；優選的，它們的質量比為1：1；當所述多肽組合物為序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽、序列4所示的多肽中的三種時，三種多肽的質量比為(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；優選的，它們的質量比為1：1：1；當所述多肽組合物為序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽中的四種時，四種多肽的質量比為(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；優選的，它們的質量比為1：1：1：1。

3.根據權利要求1所述牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽組合物，其特征在于：當所述多肽組合物為由序列表中序列1所示的多肽、以及和序列表中序列2所示的多肽組成的組合物時，兩種多肽的質量比為1：1；當所述多肽組合物為由序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽組成的組合物時，三種多肽的質量比為1：1：1；當所述多肽組合物為由序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽、序列表中序列3所示的多肽和序列表中序列4所示的多肽組成的組合物時，四種多肽的質量比為1：1：1：1。

4.一種牛結節性皮膚病病毒ELISA抗體檢測試劑盒，包括酶聯反應板、陽性對照血清、陰性對照血清、酶標二抗，其中所述酶聯反應板包被有權利要求1-3中任意一項所述的牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽組合物。

5.根據權利要求4所述的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述酶聯反應板為可拆卸96孔酶標板；所述牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽為化學人工合成得到。

6.根據權利要求4所述的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述酶聯反應板的獲得方法是將權利要求1或2所述的牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽組合物或者權利要求4所示的牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽溶于100μl的pH?9.6的碳酸鹽溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶聯反應板，每孔200ng權利要求1-3中任意一項所述的牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽組合物，2～8℃下放置8～12小時，使牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽組合物與酶聯反應板充分結合，然后按照300μl/孔加入含有0.01g/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS緩沖液，37℃封閉處理2～3小時，甩干后，待酶聯反應板干燥后4℃密封保存。

7.根據權利要求4所述的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述陽性對照血清為所述牛結節性皮膚病病毒多肽抗原免疫后制備的高免血清；所述陰性對照血清為健康黃牛血清；所述酶標二抗為辣根過氧化物酶標記羊抗牛IgG抗體。

8.根據權利要求4所述的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述底物液A為含0.6mg/ml過氧化氫尿素的檸檬酸磷酸鹽緩沖液，所述底物液B為0.2mg/ml的四甲基聯苯胺溶液，使用時兩者以1:1的比例混合；所述終止液為2mol/L的硫酸溶液。

9.根據權利要求4所述的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括樣品稀釋液和20倍濃縮洗滌液；樣品稀釋液為含有5mg/ml酪蛋白的0.01mol/L、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液；濃縮洗滌液為含有體積百分濃度為0.8％～1.2％的Tween-20的0.01mol/L，pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液。

10.牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽，為序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽、序列表中序列3所示的多肽或序列表中序列4所示的多肽；

牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽在制備檢測牛結節性皮膚病病毒病的試劑盒中的應用。