[發明專利]牛結節性皮膚病病毒ELISA抗體檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202210901011.1
• 申請日: 2022-07-28
• 公開（公告）號: CN115993449A
• 公開（公告）日: 2023-04-21
• 發明（設計）人: 李靜;張蕾;董春娜;石守定;李鵬宇;肖進;巴利民;劉新月;鄭妍妍;劉鵬;齊鵬
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/58;C07K14/065
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

本發明公開了一種牛結節性皮膚病病毒ELISA抗體檢測試劑盒。該試劑盒包括酶標板、陽性對照血清、陰性對照血清、酶標二抗、樣品稀釋液、20倍濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、終止液，其中所述酶標板包被有牛結節性皮膚病病毒抗原表位多肽組合物。該抗原表位多肽組合物為為序列表中序列1所示的多肽、以及序列表中序列2所示的多肽、序列表中序列3所示的多肽和序列表中序列4所示的多肽中的一種或兩種以上的任意組合。本試劑盒使用化學合成抗原肽包被酶標板，抗原用量少、靈敏性和特異性高，可以高效地檢測是否存在牛結節性皮膚病病毒抗體。本發明試劑盒敏感性高、特異性好、且操作便捷，具有良好的市場前景。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，更具體地，本發明涉及一種牛結節性皮膚病病毒ELISA抗體檢測試劑盒，適用于牛血清中牛結節性皮膚病病毒抗體檢測。

背景技術

牛結節性皮膚病(Lumpy?skin?disease,LSD)也稱為牛疙瘩皮膚病，是由痘病毒科山羊痘病毒屬的牛疙瘩皮膚病毒(Lumpy?skindisease?virus,LSDV)引起的急性傳染性疾病，該病可感染任何年齡階段、任何品種的牛，引起廣泛的皮膚病變和典型的全身型痘病毒感染癥狀，嚴重時可導致死亡，其中犢牛死亡率可達100％，成年牛的死亡率在3％～10％，被世界動物衛生組織(OIE)列為必須通報的動物傳染病，我國暫時將其列為二類動物疫病。該病已于2019年8月12日首次傳入我國。該病的主要傳播方式是通過吸血節肢昆蟲為媒介，這些昆蟲會隨季節氣候變化而進行大量繁殖和遷徙。隨著國際貿易往來逐年增加，貨物運輸工具的便利，也會導致該病的傳播，增加該病的在全球傳播的機率。

LSDV屬雙鏈DNA病毒，病毒粒子大小約260～320nm，基因組大小約151kb，編碼156個假定基因，可分為早期基因和晚期基因，研究顯示，L1R(ORF060)、P32(ORF074)、A27L(ORF117)、A33R(ORF122)等均為該病毒的優勢抗原。研究表明LSDV、山羊痘病毒(GTPV)和綿羊痘病毒(SPPV)同屬于痘病毒科山羊痘病毒屬(CaPV)，CaPV各個分離株基因組十分保守，SPPV、GTPV和LSDV基因組一致性均大于96％，它們之間在血清上呈交叉反應，自然條件下不會發生交叉感染。

世界動物衛生組織(OIE)推薦的用于牛結節性皮膚病的血清學診斷方法包括病毒中和試驗(VNT)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)及免疫印跡(Western-blotting)等，病毒中和試驗是檢測山羊痘病毒屬抗體的金標準，該試驗操作過程中均需使用活毒，且對操作實驗室要求較高，不適于臨床血清學檢測，因此急需研制一種便捷、快速、敏感、特異的快速抗體檢測試劑盒，用于牛結節性皮膚病病毒的抗體檢測。ELISA方法是市場上主流的免疫測定技術，已廣泛應用于臨床檢測，快速便捷且靈敏度高，且不需要特殊的儀器設備，操作過程中無需使用活毒，是用于牛結節性皮膚病抗體檢測的高通量檢測技術，且目前國內外暫無獲得批準的用于檢測牛結節性皮膚病抗體的ELISA檢測試劑盒，市場調研顯示，目前各研究機構和企業也在積極開發用于牛結節性皮膚病病毒的診斷產品。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測牛結節性皮膚病病毒抗體的間接ELISA檢測試劑盒，該試劑盒利用牛結節性皮膚病病毒L1R、P32、A27L和A33R多個蛋白上的抗原表位多肽作為包被抗原，建立了一種特異性、敏感性和重復性好的間接ELISA方法，用于檢測牛血清中是否含有牛結節性皮膚病病毒抗體。