[發明專利]一種血清中25羥基維生素D的檢測方法

在審

• 申請號: 202210895724.1
• 申請日: 2022-07-27
• 公開（公告）號: CN115356408A
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發明（設計）人: 孫培龍;吳俊芳;劉程;汪道文;許琳
• 申請（專利權）人: 廣東太穩生物工程有限公司;華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 姜磊

本發明屬于化學檢測技術領域，公開了一種血清中25羥基維生素D的檢測方法。所述檢測方法采用液相色譜串聯質譜進行檢測，所述液相色譜的條件包括：色譜柱為UPLC ACQUITY^TM HSS PFP column；流動相A為0.1％?0.5％甲酸水溶液，流動相B為甲醇。該方法特異性強、準確度高，適用于各年齡段人群血清樣本中25羥基維生素D的檢測。

技術領域

本發明屬于化學檢測技術領域，尤其涉及一種血清中25羥基維生素D的檢測方法。

背景技術

維生素D(以下稱VD)是一種脂溶性類固醇衍生物，是人體必需的維生素，主要包括VD2和VD3兩種形式。人體內的VD可以通過陽光照射轉化或從食物中攝取，例如貯存于皮下的7-脫氫膽固醇經陽光中紫外線照射后可轉化為VD3，而VD2可以通過食物進行補充。人體內的VD2和VD3經肝臟會代謝為25-OH VD2和25-OH VD3，血液中25-OH VD2和25-OH VD3濃度高，是體內VD的主要存在形式，且穩定好，體內循環半衰期約為2-3周，因此血液中的25-OHVD2和25-OH VD3成為公認的評價人體VD營養狀態的最可靠指標。

然而，在人體中還存在25-OH VD3的差向異構體——3-epi 25-OH VD3，約占總25-OH VD的4％，其在成人體內含量較低，但在新生兒體內濃度極高，約占25-OH VD總濃度的60％。3-epi 25-OH VD3不具有生物活性，在檢測時若不能有效分離該物質，將造成25-OHVD3的檢測結果偏高的誤差。

傳統的維生素D檢測方法有放射免疫法、競爭蛋白結合法、高效液相色譜法等，其中放射免疫法、競爭蛋白結合法存在前處理復雜、分析時間長、通量低、方法特異性差的缺點，且不能同時準確定量25-OH VD2和25-OH VD3的含量。目前國際普遍認為LC-MS/MS是檢測血清中25羥基維生素D的“金標準”，然而當前所用方法仍未能對差向異構體進行有效的分離，檢測結果存在偏差。

因此，本發明希望建立一種操作簡便、特異性高、靈敏度好的用于檢測人血清中25羥基維生素D的方法。

發明內容

本發明旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種血清中25羥基維生素D的檢測方法，該檢測方法特異性強、準確度高，適用于各年齡段人群血清樣本中25羥基維生素D的檢測。

本發明提供了一種血清中25羥基維生素D的檢測方法，采用液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)進行檢測，所述液相色譜的條件包括：色譜柱為UPLC ACQUITY^TM HSS PFPcolumn；流動相A為0.1％-0.5％甲酸水溶液，流動相B為甲醇。

本發明提出，以上述流動相體系結合特定的色譜柱類型，可以實現25-OH VD2、25-OH VD3和3-epi 25-OH VD3的有效分離，從而提高血清中25羥基維生素D的檢測準確性。

優選地，所述色譜柱的尺寸為2.1mm×50mm,1.8μm。

優選地，所述液相色譜采用梯度洗脫的方式。

更優選地，所述梯度洗脫的條件為：

0-4min，流動相B的體積分數由70％變化至95％；

4-4.01min，流動相B的體積分數由95％變化至70％；

4.01-4.5min，流動相B的體積分數為70％。

優選地，所述液相色譜的條件還包括：流速為0.4mL/min；柱溫為40℃；進樣量為2-10μL。

優選地，所述質譜的條件包括：ESI源正離子模式，多反應監測掃描模式；噴霧電壓：1.5-2.5kV；去溶劑溫度：450-550℃；霧化器流速800-1000L/h；離子源溫度：120-150℃；錐孔氣流速：55-65L/hr。