[發(fā)明專利]一種血清中25羥基維生素D的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210895724.1
• 申請(qǐng)日: 2022-07-27
• 公開（公告）號(hào): CN115356408A
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫培龍;吳俊芳;劉程;汪道文;許琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東太穩(wěn)生物工程有限公司;華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 姜磊

1.一種血清中25羥基維生素D的檢測(cè)方法，其特征在于，采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)，所述液相色譜的條件包括：色譜柱為UPLC ACQUITY^TM HSS PFP column；流動(dòng)相A為0.1％-0.5％甲酸水溶液，流動(dòng)相B為甲醇。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述色譜柱的尺寸為2.1mm×50mm，1.8μm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述液相色譜采用梯度洗脫的方式。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述梯度洗脫的條件為：

0-4min，流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)由70％變化至95％；

4-4.01min，流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)由95％變化至70％；

4.01-4.5min，流動(dòng)相B的體積分?jǐn)?shù)為70％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述液相色譜的條件還包括：流速為0.4mL/min；柱溫為40℃；進(jìn)樣量為2-10μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述質(zhì)譜的條件包括：ESI源正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式；噴霧電壓：1.5-2.5kV；去溶劑溫度：450-550℃；霧化器流速800-1000L/h；離子源溫度：120-150℃；錐孔氣流速：55-65L/hr。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述質(zhì)譜的檢測(cè)參數(shù)如下所示：

目標(biāo)分析物	Q1(Da)	Q3(Da)	CV(V)	CE(V)
25-OH VD2	413.3	113.1	20	10
25-OH VD3	383.3	257.2	20	15
25-OH VD2_IS	416.4	113.1	20	10
25-OH VD3_IS	386.3	257.2	20	15

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述檢測(cè)方法還包括：

以BSA為基質(zhì)，配制含不同濃度梯度目標(biāo)物的校準(zhǔn)品溶液，加入同位素標(biāo)記物進(jìn)行預(yù)處理后，用LC-MS/MS檢測(cè)；以校準(zhǔn)品溶液中目標(biāo)物的濃度為X軸，以校準(zhǔn)品溶液中目標(biāo)物與其對(duì)應(yīng)同位素標(biāo)記物的峰面積比為Y軸，繪制得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

在待測(cè)血清樣本中加入同位素標(biāo)記物，進(jìn)行預(yù)處理后用LC-MS/MS檢測(cè)，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得出待測(cè)血清樣本中25羥基維生素D的含量。