[發明專利]一種重組解脂耶氏酵母菌及其在生產赤蘚糖醇中的應用

在審

• 申請號: 202210893115.2
• 申請日: 2022-07-27
• 公開（公告）號: CN115717112A
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 饒志明;楊樹玲;徐美娟;楊套偉;張顯
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N9/02;C12N9/10;C12N9/12;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/81;C12P7/18;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

1.一種重組解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述重組解脂耶氏酵母菌為，敲除了出發菌株解脂耶氏酵母菌的Ku70基因，同時過表達了來源于解脂耶氏酵母菌的甘油激酶基因GUT1、3-磷酸甘油醛脫氫酶基因GUT2、轉酮酶基因TKL1和轉醛酶基因TAL1。

2.如權利要求1所述的重組解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述重組解脂耶氏酵母菌是以Yarrowia lipolytica PO1f為出發菌株。

3.如權利要求2所述的重組解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述重組解脂耶氏酵母菌采用pCAS1yl質粒和/或pINA1269質粒為表達載體。

4.如權利要求1～3任一所述的重組解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述Ku70基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白，所述甘油激酶基因GUT1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白，所述3-磷酸甘油醛脫氫酶基因GUT2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的蛋白，所述轉酮酶基因TKL1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的蛋白，所述轉醛酶基因TAL1的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的蛋白。

5.一種制備權利要求1～4任一所述的重組解脂耶氏酵母菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)以pCAS1yl質粒敲除出發菌株解脂耶氏酵母菌基因組上的Ku70基因；

(2)以pINA1269質粒過表達甘油激酶基因GUT1、3-磷酸甘油醛脫氫酶基因GUT2、轉酮酶基因TKL1和轉醛酶基因TAL1，制備得到重組質粒pINA1269-GUT1-TKL1-GUT2-TAL1；

(3)將制備得到的重組質粒pINA1269-GUT1-TKL1-GUT2-TAL1導入步驟(1)得到的菌株中，制備得到重組解脂耶氏酵母/pINA1269-GUT1-TKL1-GUT2-TAL1。

6.一種生產赤蘚糖醇的方法，其特征在于，所述方法為，將權利要求1～4任一所述的重組解脂耶氏酵母菌添加至以生物柴油廢棄物為唯一碳源的反應體系中發酵制備赤蘚糖醇。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，將所述重組解脂耶氏酵母菌種子液添加至含有以生物柴油廢棄物為唯一碳源的反應體系中進行發酵，制備得到發酵液，從發酵液中分離得到赤蘚糖醇；所述生物柴油廢棄物含有粗甘油，所述粗甘油的成分按照質量分數為：甘油80～85％，鈉鹽2.0％，甲醇10～15％，其他有機物2.5％和水2％。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法為，將所述重組解脂耶氏酵母菌接種至種子培養基中進行培養，得到一級種子液；將一級種子液按照10％的接種量轉接至種子培養基中，進行培養，得到二級種子液；將制備得到的二級種子液按照20％的接種量接種至含有粗甘油的發酵培養基中進行發酵，制備得到赤蘚糖醇。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，將種子液接種至發酵培養基中，溶氧控制在20％～30％。

10.權利要求1～4任一所述的重組解脂耶氏酵母菌在制備含有赤蘚糖醇的產品中的應用。