[發(fā)明專利]一種工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210884476.0
• 申請日: 2022-07-25
• 公開（公告）號: CN115152352B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊柳;高嬙;金勛;潘紅麗;李娜;芮海英;李澤宇;郭麗;王迪;馮鵬;韓墨;齊國超;金鈴;韓冰;車野;師臣;任翠梅;趙踐韜;李冬梅;劉冰
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大慶分院
• 主分類號: A01C1/00
• 分類號: A01C1/00;A01C1/08;A01G31/00
• 代理公司: 哈爾濱華夏松花江知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23213
• 代理人: 侯靜

1.一種工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法按照以下步驟進(jìn)行：

一、種子精選

挑選成熟、完整飽滿、無病蟲侵害、有光澤的工業(yè)大麻種子，種子凈度達(dá)到100％，純度達(dá)到100％，發(fā)芽率達(dá)到99％以上；

二、種子浸泡

用清水浸泡直至種子頂破種皮露出白色胚根后剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮；

三、種子滅菌

將剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮的工業(yè)大麻種子放入裝有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2％的次氯酸鈉的三角瓶中進(jìn)行滅菌處理，滅菌時間總計(jì)30～35分鐘；滅菌分3次處理，每隔10-12分鐘更換1次新的次氯酸鈉，滅菌處理過程中搖動三角瓶以達(dá)到滅菌徹底的效果；滅菌處理后用無菌水沖洗種子3-4遍，將發(fā)芽種子表面的次氯酸鈉沖洗干凈；

四、培養(yǎng)皿培養(yǎng)

將MS固體培養(yǎng)基滅菌后分裝入培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基凝固冷卻后將滅菌完成的種子接種到皿中，培養(yǎng)皿用報(bào)紙包裹后，放于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)2-3天，得到無菌的發(fā)芽種子；

五、繁殖

將無菌的發(fā)芽種子轉(zhuǎn)移到裝有MS固體培養(yǎng)基的容器中繼續(xù)培養(yǎng)10-15天，得到無菌實(shí)生苗；

六、移栽

將無菌實(shí)生苗直接移栽，或?qū)o菌實(shí)生苗擴(kuò)繁生根后進(jìn)行移栽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟四所述培養(yǎng)條件為：溫度為25℃，濕度為40-50％，光照強(qiáng)度為2000-2500Lux，16h光照/8h黑暗。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟五所述容器為組培瓶或試管。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟五所述培養(yǎng)條件為：溫度為25℃，濕度為40-50％，光照強(qiáng)度為4000-5000Lux，16h光照/8h黑暗。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟六所述移栽方法為：選擇株型完整、莖稈粗壯、根系完整的無菌實(shí)生苗移栽，出瓶時將培養(yǎng)基與無菌實(shí)生苗一起取出，洗凈根部的培養(yǎng)基和瓊脂，轉(zhuǎn)移到裝有基質(zhì)的盆中，基質(zhì)需要提前滅菌；所述基質(zhì)由粗椰糠、細(xì)椰糠和泥炭組成；粗椰糠、細(xì)椰糠和泥炭的質(zhì)量比為0.15:0.35:0.5；所述基質(zhì)的滅菌方法為：在121℃的高壓鍋中濕熱滅菌30-40分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟四和五中所述MS固體培養(yǎng)基中含有的營養(yǎng)元素包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)物，每升培養(yǎng)基含有18-20g瓊脂粉。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：所述大量元素為KNO₃、NH₄NO₃、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄和CaCl₂·2H₂O；所述微量元素為MnSO₄·4H₂O、ZnSO4·7H₂O、H₃BO₃、KI、Na₂MnO4·2H₂O、CuSO₄·5H₂O、CoCl₂·6H₂O；所述鐵鹽為Na₂-EDTA和FeSO₄·7H₂O；所述有機(jī)物為甘氨酸、鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素、煙酸和肌醇。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的工業(yè)大麻無菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基中大量元素的含量為：KNO₃：1.9g/L，NH₄NO₃：1.65g/L，MgSO₄·7H₂O：0.37g/L，KH₂PO₄：0.17/L，CaCl₂·2H₂O：0.44g/L；

所述培養(yǎng)基中微量元素的含量為：MnSO₄·4H₂O：0.023g/L，ZnSO4·7H₂O：0.0086g/L，H₃BO₃：0.0062g/L，KI：0.00083g/L，Na₂MnO4·2H₂O：0.00025g/L，CuSO₄·5H₂O：0.000025g/L，CoCl₂·6H₂O：0.000025g/L；

所述培養(yǎng)基中鐵鹽的含量為：Na₂-EDTA：0.037g/L和FeSO₄·7H₂O：0.0278g/L；

所述培養(yǎng)基中有機(jī)物的含量為：甘氨酸：0.0001g/L，鹽酸吡哆醇：0.00025g/L，鹽酸硫胺素：0.00005g/L，煙酸：0.00025g/L，肌醇：0.05g/L；

所述鐵鹽的配置方法：將FeSO₄·7H2O和Na₂-EDTA·2H₂O分別稱好，分別放到餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使溶解，然后將兩種溶液混合，并將pH調(diào)至5.5，加熱至沸騰，當(dāng)顏色變深黃色后，定容到1L，保存在棕色玻璃瓶中。