[發明專利]一種高效雜交瘤融合方法在審
| 申請號: | 202210878628.6 | 申請日: | 2022-07-25 |
| 公開(公告)號: | CN115947861A | 公開(公告)日: | 2023-04-11 |
| 發明(設計)人: | 鄧加武;王明強;呂奕;芮兵 | 申請(專利權)人: | 南京佰抗生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C07K19/00 | 分類號: | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N15/06 |
| 代理公司: | 南通英諾威訊專利代理事務所(普通合伙) 32508 | 代理人: | 范鑫鑫 |
| 地址: | 210033 江蘇省南京市棲霞區*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 高效 雜交瘤 融合 方法 | ||
1.一種高效雜交瘤融合方法,其特征在于,包括以下步驟:
S1、構建IL2信號肽、特定的CD19scfv蛋白和CD28跨膜結構域融合序列,融合蛋白命名為MGCP,氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示;
S2、對上述融合蛋白MGCP氨基酸序列對應的核苷酸序列進行密碼子優化,得到優化后的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示;
S3、將上述核苷酸序列委托合成后構建至PLVX-puro慢病毒表達載體,上述載體轉染骨髓瘤細胞SP2/0后轉錄翻譯形成融合蛋白MGCP并被轉運至細胞表面,MGCP識別結合小鼠脾細胞表面的CD19蛋白,通過上述兩種蛋白的結合可實現骨髓瘤細胞和脾細胞在物理空間上的定向緊密貼合。
2.根據權利要求1所述的一種高效雜交瘤融合方法,其特征在于:IL2信號肽負責引導MGCP蛋白翻譯后轉移至內質網進行修飾。
3.根據權利要求1所述的一種高效雜交瘤融合方法,其特征在于:CD28跨膜結構負責MGCP蛋白錨定至細胞表面。
4.根據權利要求1所述的一種高效雜交瘤融合方法,其特征在于:CD19scfv負責識別結合脾細胞表面的CD19蛋白。
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