[發明專利]一種醫用級Ⅲ型膠原蛋白的制備方法和Ⅲ型膠原蛋白

在審

• 申請號: 202210874082.7
• 申請日: 2022-07-24
• 公開（公告）號: CN115572328A
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 肖建喜;李文華
• 申請（專利權）人: 膠原蛋白（武漢）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/30;C07K1/14;C12P21/06;A61L2/00
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

本發明屬于生物醫用材料領域，具體涉及一種醫用級Ⅲ型膠原蛋白的制備方法，包含如下步驟：動物胎盤組織預處理、脫細胞、脫脂、除雜、酶切、鹽析純化、脫鹽濃縮；所述的鹽析方法為：在堿性條件下對含有Ⅲ型膠原蛋白的動物源膠原蛋白混合物進行鹽析，一步鹽析即可得到高純度的Ⅲ型膠原蛋白，純度達到95％以上；制備得到的動物胎盤Ⅲ型膠原蛋白具有良好的三螺旋結構以及特征性的纖維網狀結構；內毒素含量低于0.5Eu/mL，達到醫用標準；可應用于活性護膚品、皮膚修復敷料、植入劑、人工皮膚、醫療器械、保健食品等領域。

技術領域

本發明屬于生物醫用材料領域，具體涉及一種醫用級Ⅲ型膠原蛋白的制備方法和Ⅲ型膠原蛋白。

背景技術

膠原蛋白是動物體內含量最多、分布最廣的蛋白質，是結締組織的主要組成成分。Ⅲ型膠原蛋白是一種間質膠原，由3條α₁(Ⅲ)鏈組成。它是皮膚、血管等組織的主要纖維蛋白成分之一。Ⅲ型膠原蛋白通常與Ⅰ型膠原蛋白共生，作為一種伴生膠原蛋白，Ⅲ型膠原蛋白在哺乳動物體內多以富有彈性的薄纖維層的形式與Ⅰ型膠原形成纖維組織。Ⅲ型膠原蛋白在人體創傷愈合、組織修復中發揮重要作用，在皮膚修復敷料中有良好的應用效果。Ⅲ型膠原蛋白呈現出獨特的三螺旋結構，三螺旋結構是Ⅲ型膠原蛋白具有良好生物功能的關鍵因素。因此，從動物組織中提取Ⅲ型膠原蛋白的關鍵，是在保證其純度的前提下，在提取過程中保持Ⅲ型膠原蛋白的結構完整性，防止其發生變性。同時，作為醫用材料的Ⅲ型膠原蛋白，對于純度和安全性均有嚴格的要求，對膠原蛋白中含有的內毒素等成分含量也設置了嚴格的行業標準。

胎盤是哺乳類胎生動物在懷胎時為胎兒供應養分、讓胚胎生長的特殊組織，它在分娩時排出體外，胎盤在我國入藥已有幾千年的歷史。哺乳動物胎盤含有豐富的膠原蛋白成分，其中Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型膠原蛋白的含量占比最高。中國專利CN1030528C利用胃蛋白酶，從人胎盤中提取得到不同類型膠原蛋白的混合物，其中Ⅲ型膠原蛋白的含量低。中國專利CN101717804B從新生犢牛皮中提取制備Ⅲ型膠原蛋白，該方法使用高濃度的鹽酸胍和加熱使膠原蛋白發生變性，喪失膠原蛋白生物功能必需的三螺旋結構。如何高效制備高純度、具有完整三螺旋結構的III型膠原蛋白亟待研究。

鹽析是蛋白質純化的重要方法。目前已建立包含復溶、鹽析沉淀、復溶脫鹽步驟的多步鹽析純化工藝，從膠原蛋白混合物中純化得到單一類型的膠原蛋白。然而，該工藝步驟繁瑣、周期長，鹽析都是在酸性或者中性條件下進行。發明專利CN103772734A公開的高純度膠原蛋白海綿的制備方法中，鹽析是在pH值為7.0條件下進行；發明專利CN111748030A公開的一種可溶性非變性II型膠原蛋白及其制備方法，鹽析是在pH值為2.0-7.0條件下進行的；發明專利CN113061178A公開的梅花鹿鹿皮膠原蛋白及膠原蛋白肽的制備方法中，鹽析是在pH為7.0條件下進行的；發明專利CN103882082B公開的一種I型和V型膠原蛋白的制備方法中，鹽析是在pH為7.5條件下進行的。

發明人在研究過程中意外的發現，在堿性條件下，對含有Ⅲ型膠原蛋白的動物膠原蛋白混合物進行鹽析，可以一步得到高純度Ⅲ型動物膠原蛋白，且制備得到的Ⅲ型動物膠原蛋白，純度達到95％以上；其保持良好的三螺旋結構，為非變性Ⅲ型膠原蛋白，并且內毒素含量低于0.5Eu/mL，達到醫用標準；可用于制備護膚品、皮膚修復敷料、植入劑、醫療器械、保健食品等。

發明內容

針對以上技術問題，本發明的目的在于提供一種從動物組織中提取制備Ⅲ型膠原蛋白的方法，制備方法為：在堿性條件下，對含有Ⅲ型膠原蛋白的動物膠原蛋白混合物進行鹽析，得到高純度Ⅲ型膠原蛋白。

優選的，鹽析條件：pH為：8.5-10.0，鹽濃度為：0.1-1.5M。

優選的，所述動物組織為動物胎盤。