[發明專利]一種醫用級Ⅲ型膠原蛋白的制備方法和Ⅲ型膠原蛋白

在審

• 申請號: 202210874082.7
• 申請日: 2022-07-24
• 公開（公告）號: CN115572328A
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 肖建喜;李文華
• 申請（專利權）人: 膠原蛋白（武漢）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/30;C07K1/14;C12P21/06;A61L2/00
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

1.一種從動物組織中提取制備Ⅲ型膠原蛋白的方法，其特征在于，制備方法為：在堿性條件下，對含有Ⅲ型膠原蛋白的動物膠原蛋白混合物進行鹽析，得到高純度Ⅲ型膠原蛋白。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，鹽析條件：pH為：8.5-10.0，鹽濃度為：0.1-1.5M。

3.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述動物組織為動物胎盤。

4.一種Ⅲ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，包含如下步驟：動物胎盤組織預處理、脫細胞、脫脂、除雜、酶切、鹽析純化、脫鹽濃縮，所述的鹽析方法為：在堿性條件下對含有Ⅲ型膠原蛋白的動物膠原蛋白混合物進行鹽析，鹽析條件：pH為：8.5-10.0，鹽濃度為：0.1-1.5M。

5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的脫細胞方法為：用酸溶液，和/或鹽溶液，和/或緩沖溶液，和/或表面活性劑，和/或過氧化物溶液處理動物胎盤組織；所述脫脂方法為：用正丁醇，和/或氯仿-甲醇溶液，和/或氯仿-甲醇-水溶液，和/或乙醚，和/或正己烷，和/或丙酮，和/或乙醇-正己烷溶液，和/或乙醇溶液，和/或表面活性劑處理動物胎盤組織；所述除雜方法為：用氫氧化鈉溶液，和/或氫氧化鉀溶液處理動物胎盤。

6.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)動物胎盤預處理：將動物胎盤切碎為小塊，在純化水中洗滌除去雜質和組織外血液殘留；

(2)脫細胞：通過定速攪拌的方法在容器中依次利用NaCl溶液、表面活性劑溶液和過氧化物溶液對預處理后的動物胎盤進行脫細胞處理；

(3)脫脂：通過定速攪拌的方法在新配制的濃度為5％-30％v/v的正丁醇溶液中處理脫細胞處理后的動物胎盤碎片3-5次，每次6-18h；

(4)除雜：通過定速攪拌的方法在0.01-2.0M的氫氧化鈉溶液中對脫脂后的動物胎盤碎片0.5-72h進行雜蛋白去除處理；

(5)酶切：采用酶切法提取經過除雜處理后的動物胎盤中的膠原蛋白，獲得動物膠原蛋白混合物；

(6)鹽析：將動物膠原蛋白混合物pH調節至堿性條件，對動物膠原蛋白混合物進行鹽析，獲得Ⅲ型膠原蛋白沉淀；

(7)脫鹽、濃縮：采用超濾、透析和凝膠色譜方法中的一種或者幾種任意組合，對得到的Ⅲ型膠原蛋白溶液進行脫鹽和濃縮處理。

7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中用濃度為5-30％m/v的NaCl溶液浸泡過夜；用純化水沖洗至無殘留后用濃度為0.1-2％v/v的表面活性劑浸泡處理0.5-6h；再次用純化水沖洗后用濃度為3-10％v/v的過氧化物溶液浸泡處理30-60min。

8.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述表面活性劑包括SDS/TritonX-100、Na₂EDTA、雙氯苯雙胍己烷、苯扎氯銨/十二烷基二甲基芐基氯化銨、苯扎溴銨中的任一種；所述過氧化物包括過氧化氫、過氧乙酸中的任一種。

9.一種醫用級Ⅲ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述方法為：將權利要求4-8任一所述方法制備獲得的Ⅲ型膠原蛋白在溫度不高于25℃下進行輻射滅菌處理，即得。

10.一種根據權利要求9所述的方法制備得到的醫用級Ⅲ型膠原蛋白。

11.一種醫用級Ⅲ型膠原蛋白，其特征在于，所述醫用級Ⅲ型膠原蛋白中包括95％以上的Ⅲ型膠原蛋白，所述醫用級Ⅲ型膠原蛋白內毒素低于0.5Eu/mL。

12.如權利要求10或11所述的醫用級Ⅲ型膠原蛋白在制備活性護膚品、皮膚修復敷料、植入劑、人工皮膚、醫療器械、保健食品中的應用。