[發明專利]一種比率型電化學適配體傳感器的制備方法

在審

• 申請號: 202210856605.5
• 申請日: 2022-07-21
• 公開（公告）號: CN115201296A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 李發蘭;郜曉琳;孫霞;郭業民;楊青青;張妍妍;孫志聰
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種比率型電化學適配體傳感器的制備方法，其特征在于：設計一種5'端二茂鐵（Fc）標記的引物，制備電化學功能的納米復合材料石墨炔-亞甲基藍（GDY-MB），當卡那霉素（KAN）存在時會引起Fc和MB兩電信號變化，構建比率型電化學適配體傳感器，并結合核酸外切酶I（Exo I）引起的靶標循環和氧化錫銻和納米金（ATO/AuNps）納米材料導電輔助的雙信號放大策略檢測牛奶中KAN。

2.根據權利要求1所述的設計一種5'端Fc標記引物的方法，其特征在于：設計部分序列能夠與適配體（Apt）部分序列雜交形成雙鏈的引物，在引物的5’端標記二茂鐵電信號分子，在3’端增加polyA短核酸鏈并在末端腺嘌呤上進行磷酸化修飾防止被Exo I剪切，由于雙鏈的剛性結構Fc遠離電極表面，Fc電信號弱，當KAN存在時，特異性結合Apt釋放引物，引物中設計的自身互補部分通過堿基互補配對形成發夾結構，Fc接近電極表面，引起Fc電信號增加。

3.根據權利要求1所述的結合Exo I引起的靶標循環的方法，其特征在于：取等體積的Apt和其互補引物，使用TE緩沖液配置成互補鏈溶液，然后取互補鏈，KAN，Exo I酶緩沖液和Exo I酶于離心管中混合孵育，被目標物競爭下來的游離Apt被Exo I剪切，然后重新釋放循環，最后，將混合物加熱以終止循環靶標。

4.根據權利要求1所述的制備GDY-MB的方法，其特征在于：為了制備具有電化學功能的GDY-MB納米復合材料，首先制備石墨炔的良好分散液，取石墨炔分散于硫酸和硝酸混合液中，超聲至完全溶解，將分散體多次離心并用超純水洗滌至中性，用超純水定容，然后取MB溶液和GDY溶液進行超聲混合處理，將復合物離心，并分別用乙醇和超純水洗滌至溶液變成無色，最后定容，MB負載于GDY的GDY-MB納米復合材料制備完成。

5.根據權利要求1所述的制備CS-ATO的方法，其特征在于：首先制備殼聚糖溶液作為分散劑和穩定劑，然后稱取ATO分散于上述制備的殼聚糖溶液中，超聲至完全溶解。

6.根據權利要求1所述的構建比率型電化學Apt傳感器的方法，其特征在于：將ATO，GDY-MB和AuNPs逐層滴在金電極上，最后取權利要求3中的循環產物滴加在修飾好的電極表面，等待polyA與AuNPs結合，從而使發夾結構（HP）緊密固定在電極表面，由此，得到比率型電化學適配體傳感器。