[發明專利]利用降落式梯度培養基生產脫毒草莓組培苗的方法

在審

• 申請號: 202210854782.X
• 申請日: 2022-07-18
• 公開（公告）號: CN115191354A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 孫文婷;屈艷;袁茹;朱海英;趙文文;趙紅艷;柳芳
• 申請（專利權）人: 華亭市正元生態農業發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 蘭州塞維思知識產權代理事務所(普通合伙) 62208
• 代理人: 焦海紅

1.利用降落式梯度培養基生產脫毒草莓組培苗的方法，其特征在于：該方法為以下步驟：

步驟S1、梯度篩選實驗；

步驟S2、ms培養基的配置和滅菌；

S2.1.配置培養基；

ms培養基配置：稱取ms培養基4.43g/L,加入30g/L蔗糖至燒杯中，按照實驗設計量溶于一定量的蒸餾水中；

同時配置生長調節劑，清理洗滌實驗用具；

S2.2.滅菌；

采用高壓滅菌鍋滅菌；

S2.3.分裝；

提前將滅好并烘干的培養瓶放入超凈工作臺中，用紫外殺菌30min以上，徹底滅菌后將裝有培養基的三角瓶整齊擺放在試驗臺上冷卻到50-55℃后拿到超凈工作臺中，及時進行分裝，每瓶倒30-40ml,在培養基完全定型之前切勿移動；

步驟S3、外植體的獲取及滅菌；

S3.1.外植體獲??；

剪取長約3-4cm生長健壯的任意草莓品種的草莓匍匐莖莖尖，作為組織培養的外植體；

S3.2.消毒；

步驟S4、接種、室內培養及誘導生根；

S4.1.接種；

S4.2.室內培養；

培養室要求干凈清潔，室內裝有紫外線殺菌燈，每天要對室內進行消毒，以防污染；

培養溫度25℃，相對濕度70％，光照強度2000lx，每日光照16小時左右；

S4.3.叢生芽繼代；

培養30-40d后，培養瓶內的小莖尖就會分出3-5個叢生芽，把這些叢生芽分出放于繼代培養基內培養；

本實驗采用的繼代培養基為降落式梯度培養基，即從繼代2、3、4分別采用濃度為MS+0.4mg/L6-BA+0.04mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂、MS+0.3mg/L6-BA+0.03mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂、MS+0.2mg/L6-BA+0.02mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂的培養基進行繼代培養；

S4.4.誘導生根；

步驟S5、溫室馴化；

S5.1.過度適應；

將組培苗從培養箱中移出放在溫室內，半遮蔭，光照控制在5000-8000lx,溫度控制在22-24℃，在室內慢慢一圈圈打開生好根的組培苗的培養瓶蓋進行馴化，移栽前3天左右要每天擰松一圈，直至松蓋，常溫條件下放置2-3d后；

S5.2.洗苗；

溫水清洗，防止傷根；

操作時需要注意的是：

1.一定要沖洗干凈根部殘留的培養基，以防移栽后發霉；

2.如果組培苗根部連在一起，需要小心地將它們分開；

3.洗苗后將苗子放置于陰涼處，碼好苗子，并做好保濕，濾水約10min后便可移栽，或用多菌靈等殺菌劑浸泡10-30min，然后用清水清洗后濾水移栽；

步驟S6、組培苗移栽；

移栽時盡量避開仲夏和寒冬季節練苗；

練苗前期要保持濕度在85％以上，90％最佳；

S6.1.基質準備；

基質準備：煉苗一般均用復合基質；

基質消毒：基質在使用前應消毒滅菌；

S6.2.場地準備；

穴盤移栽搭至拱棚后鋪設遮陽網，棚內底面鋪5-10cm的濾水材料，再在其上面鋪地布，移栽時將容器置于地布上；

S6.3.設備用具；

洗苗大盆、塑料網框、鐵鏟、容器(穴盤或營養缽)、鑷子、竹簽或木棍、噴霧器或自控噴灌系統；

S6.4.移栽；

將洗凈培養基的小苗栽入經過消毒的腐殖土(草炭土)-蛭石-珍珠巖(1:1:1)為基質的育苗盤中；

在移栽前將基質裝入育苗盤中，輕壓，澆透水，栽時要用鑷子夾住幼苗根部插入穴盤深栽，保證幼苗的根部與土表齊平，要露出生長點；

組培苗移栽后澆水定根，前期要遮陽，后期逐漸增加光照，以散射光為主；

保濕培養，溫度控制在15-20℃，濕度控制在90％以上；

整個移栽過程的病害控制采取每隔7-10天噴一次殺菌劑的措施，殺菌劑可使用多菌靈、百菌清、甲基托布津等。