[發明專利]一種XNA分子鉗-多重熒光PCR法基因突變檢測方法

在審

• 申請號: 202210854682.7
• 申請日: 2022-07-18
• 公開（公告）號: CN115198006A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 李建平;周濤;高智勇;何奕輝;張愛國
• 申請（專利權）人: 南京帝基生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 南京蘇博知識產權代理事務所(普通合伙) 32411
• 代理人: 章雅琴

1.一種XNA分子鉗-多重熒光PCR法基因突變檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

制備待測樣品；

提取所述待測樣品中的DNA和RNA，并將所述RNA逆轉處理，得到cRNA，再將所述cRNA和所述DNA混合后進行多重熒光PCR擴散，得到熒光樣品；

通過熒光PCR擴增儀檢測所述熒光樣品，并顯示所述熒光樣品的ct值判定檢測結果。

2.如權利要求1所述的一種XNA分子鉗-多重熒光PCR法基因突變檢測方法，其特征在于，

所述制備待測樣品的具體方式：

將各個來源于無肺病病史健康人群唾液與糞便樣本均接種于培養基中，37℃靜置厭氧培養20-40h；

分別取各個所述培養基中的培養液4ml進行離心，5500rpm，10min，離心后的菌體用pH為6.8的無菌生理鹽水洗滌，洗滌后再次進行離心，5500rpm，10min，得到無菌純水懸浮菌體；

將400uL的所述無菌純水懸浮菌體，沸水浴10min，10000rpm離心15min，收集上清液。

3.如權利要求1所述的一種XNA分子鉗-多重熒光PCR法基因突變檢測方法，其特征在于，

所述提取所述待測樣品中的DNA和RNA，并將所述RNA逆轉處理，得到cRNA，再將所述cRNA和所述DNA混合后進行多重熒光PCR擴散，得到熒光樣品的具體方式：

提取所述待測樣品中的DNA和RNA，往提取到的所述RNA加熱入逆轉錄反應液，所述RNA與所述逆轉錄反應液中的逆轉錄酶混合，得到cRNA；

將所述DNA和所述cRNA分別與混合酶混合，并對混合的所述DNA和所述cRNA進行多重熒光PCR擴散，得到所述熒光樣品。

4.如權利要求1所述的一種XNA分子鉗-多重熒光PCR法基因突變檢測方法，其特征在于，

所述PCR擴增的反應條件為94℃預變性3min，94℃變性10S，55℃退火30S，72℃延伸90S，整個體系做28個循環，72℃后延伸5min。

5.如權利要求1所述的一種XNA分子鉗-多重熒光PCR法基因突變檢測方法，其特征在于，

所述熒光PCR擴增儀包括殼體、擴增儀本體、調溫板和放置組件，所述擴增儀本體與所述殼體固定連接，且位于所述殼體內，所述調溫板設置于所述殼體內，所述放置組件設置于所述調溫板遠離所述擴增儀本體一側。

6.如權利要求5所述的一種XNA分子鉗-多重熒光PCR法基因突變檢測方法，其特征在于，

所述放置組件包括放置板、頂桿、固定桿和滑塊，所述頂桿設置于所述殼體靠近所述擴增儀本體一側，所述放置板與所述殼體滑動連接，且位于所述殼體內，所述殼體具有卡槽，所述放置板具有滑槽，所述固定桿設置于所述滑槽內，所述滑塊與所述固定桿固定連接，并貫穿所述放置板。

7.如權利要求6所述的一種XNA分子鉗-多重熒光PCR法基因突變檢測方法，其特征在于，

所述固定桿包括滑桿和第一彈簧，所述滑桿與所述放置板滑動連接，且位于所述滑槽內，所述第一彈簧與所述滑桿固定連接，并與所述放置板固定連接，且位于所述滑桿和所述放置板之間。