[發(fā)明專利]一種基于suPAR/KL-6免疫層析試劑盒及其制備方法和應用

在審

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• 申請日: 2022-07-19
• 公開（公告）號: CN115616220A
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發(fā)明（設計）人: 孫彧峰;關恒;張金玲;丁書博;林琳;牛公正
• 申請（專利權）人: 長春恒曉生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 北京中政聯(lián)科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 王玉玨

本發(fā)明提供一種基于suPAR/KL?6免疫層析試劑盒，包括免疫層析檢測卡，樣品液和suPAR/KL?6質控品；本發(fā)明還提供一種基于suPAR/KL?6免疫層析試劑盒的制備方法，包括如下步驟：制備suPAR抗體?熒光微球；制備KL?6抗體?熒光微球；制備IgG?熒光微球；噴涂Fusion5和硝酸纖維素膜；組裝免疫層析檢測卡；制備樣品液和suPAR/KL?6質控品；本發(fā)明通過通過免疫熒光分析儀對T1線、T2線和C線熒光信號進行掃描，獲得T1線，T2線和C線的相對熒光強度單位(Relative fluorescence units，RFU)，獲得T1/C RFU比值，與樣品中suPAR濃度成正相關，得出樣品中suPAR濃度；獲得T2/C RFU比值，與樣品中KL?6濃度成正相關，得到樣品中KL?6濃度，實現(xiàn)同步檢測，完成免疫層析過程，也作為穩(wěn)定因子，矯正外界因素引發(fā)微球熒光強度不一致性。

技術領域

本發(fā)明屬于免疫學技術領域，更具體地說，涉及一種基于 suPAR/KL-6免疫層析試劑盒；尤其涉及一種基于suPAR/KL-6免疫層析試劑盒的制備方法和應用。

背景技術

急性呼吸窘迫綜合征(Acuterespiratorydistresssyndrome， ARDS)是一種急性彌漫性炎癥性肺損傷，導致的急性低氧性呼吸功能不全或衰竭。細菌，病毒或真菌等嚴重感染，如敗血癥或膿毒血癥，或肺炎引發(fā)超過50％ARDS；創(chuàng)傷，燒傷、胰腺炎、休克和吸入異物等引發(fā)ARDS。急性全身炎癥或肺部損傷發(fā)生時，誘發(fā)肺內小氣囊(肺泡)和毛細血管損傷，引發(fā)肺部液體泄漏，肺泡積液，損傷肺泡擴散功能，這些肺細胞形成肺部微小氣囊屏障，肺表面活性物質活性下降，發(fā)生肺泡萎陷。肺泡積液和肺泡萎陷阻礙氧氣由吸入氣向血液中的移動，引起血中氧濃度急劇下降，從而導致嚴重的低氧血癥。肺部的炎癥反應產生大量細胞介素，漏入血循環(huán)系統(tǒng)，引發(fā)全身炎癥反應或其他器官并發(fā)癥，進一步引發(fā)多個臟器功能衰竭。

研究發(fā)現(xiàn)，重癥監(jiān)護病房(ICU)所有患者，多達10％發(fā)生ARDS，死亡率達40-50％，需要早期診斷ARDS，及時治療ARDS患者臨床發(fā)病前的全身炎癥反應及肺部損傷，可明顯改善ARDS預后及降低 ARDS死亡率。

研究發(fā)現(xiàn)，檢測血液中可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體 (Solubleurokinaseplasminogenactivatorreceptor，suPAR)和 KrebsvondenLungen-6(KL-6)水平可用于早期判定ARDS的發(fā)生。

尿激酶型纖溶酶原激活物受體(Urokinaseplasminogen activatorreceptor，uPAR)是一個分質量為55-60KD單鏈膜糖蛋白受體，成熟uPAR含3個同源結構域，即D1、D2、D3結構域，其中D1與抗原決定簇相關，D2和D3定位細胞膜有關。uPAR不含跨膜序列，其D3區(qū)域羧基末端連接一個糖基化磷脂酰肌醇(GPI)錨，將uPAR連接于細胞膜的磷脂雙分子層表面，其氨基端D1區(qū)域則提供尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)的結合位點,可高親和力結合 uPA，使纖溶酶原的激活增強，加速細胞外基質降解，便于細胞遷移。 uPAR主要由嗜中性粒細胞、活化T細胞和巨噬細胞表達，而肺細胞也表達uPAR，在炎癥刺激下，uPAR可在多種蛋白酶的作用下，從細胞表面脫落成為一種可溶性suPAR，存在于血液、尿液、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液及唾液中。多種疾病發(fā)生可激活免疫系統(tǒng)，引發(fā)血液中suPAR水平升高。suPAR參與細胞黏附、游走、趨化、蛋白水解、免疫活化、組織修復、腫瘤細胞浸潤和信號轉導。血液中suPAR水平能夠反映免疫活化的程度，suPAR水平越高，表明疾病的預后就越差。與其他炎癥因子比較，血液中suPAR水平晝夜變化較小，且不受飲食的影響，血液中suPAR是穩(wěn)定的炎癥因子指標。