[發(fā)明專利]一種小分子肝肽的提取方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210852133.6
• 申請日: 2022-07-19
• 公開（公告）號: CN115181775A
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張建明
• 申請（專利權(quán)）人: 張建明
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種小分子肝肽的提取方法，涉及生物肽分離技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明在提取小分子肝肽時，經(jīng)過初步酶解、二次酶解、三次酶解、滅酶、分離純化、濃縮凍干；初步酶解時使用消化酶和肽聚糖降解酶，二次酶解時使用消化酶和肽聚糖降解酶，三次酶解時使用細胞色素氧化酶和腎上腺素，并加入二甲基亞砜和2?吡啶硫基，加入的二甲基亞砜和2?吡啶硫基能夠在三次酶解液中的多肽分子內(nèi)氧化生成少量二硫鍵，既提高小分子肝肽的得率，降低了苦味，還增強小分子肝肽的穩(wěn)定性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物肽分離技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種小分子肝肽的提取方法。

背景技術(shù)

肝臟是動物身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用。牛肝、豬肝、雞肝等動物肝臟含有豐富的蛋白質(zhì)、糖類、礦物質(zhì)和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)。肝臟多肽可以作為一種良好的醫(yī)藥化工原料和功能性食品，據(jù)報道，肝臟多肽具有天然的生物活性，能夠提高機體的免疫力，還具有抗氧化，促進凝血以及抑制腫瘤生長等功能；

現(xiàn)有的小分子肝肽的提取工藝存在效率較低，提取的小分子肝肽中雜質(zhì)含量較多以及帶有苦味的缺陷；因此，研究一種提取效率高、小分子肝肽純度高的肝肽提取工藝對實現(xiàn)動物肝臟中多肽的綜合開發(fā)具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種小分子肝肽的提取方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

一種小分子肝肽的提取方法，所述小分子肝肽的提取方法包括初步酶解、二次酶解、三次酶解、滅酶、分離純化、濃縮凍干。

優(yōu)選的，所述初步酶解時使用消化酶和肽聚糖降解酶；所述二次酶解時使用消化酶和肽聚糖降解酶；所述三次酶解時使用細胞色素氧化酶和腎上腺素，并加入二甲基亞砜和2-吡啶硫基。

優(yōu)選的，所述一種小分子肝肽的制備方法，包括以下具體步驟：

(1)將新鮮動物肝臟用打漿機打碎，并加入新鮮動物肝臟質(zhì)量5～8倍的純化水，攪拌均勻后，升溫至50～55℃，加入消化酶和肽聚糖降解酶，在30～50rpm下攪拌酶解20～40min，制得初次酶解液；

(2)向初次酶解液中加入蛋白酶、糖原磷酸化酶和小麥羧肽酶，攪拌均勻后降溫至15～30℃，在30～50rpm下攪拌酶解30～50min，制得二次酶解液；

(3)向二次酶解液中加入細胞色素氧化酶和腎上腺素，攪拌均勻后，升溫至50～60℃，在30～50rpm下攪拌酶解10～20min，再加入二甲基亞砜和2-吡啶硫基，反應(yīng)2～4h，制得三次酶解液；

(4)將三次酶解液滅酶，然后進行離心，得上清液，將上清液經(jīng)過納濾膜納濾，最后進行冷凍干燥，制得小分子肝肽。

優(yōu)選的，上述步驟(1)中：新鮮動物肝臟為豬、牛、羊或鯊魚的肝臟中的一種或幾種混合。

優(yōu)選的，上述步驟(1)中：新鮮動物肝臟、消化酶和肽聚糖降解酶質(zhì)量比為100:0.6:1～100:1.5:1.5。

優(yōu)選的，上述步驟(2)中：初次酶解液、蛋白酶、糖原磷酸化酶和小麥羧肽酶的質(zhì)量比為100:1:0.5:0.8～100:3:1.2:1.5。

優(yōu)選的，上述步驟(3)中：二次酶解液、細胞色素氧化酶、腎上腺素、二甲基亞砜和2-吡啶硫基的質(zhì)量比為100:2:1:30:0.3～100:2.5:2:50:0.5。

優(yōu)選的，上述步驟(4)中：滅酶時，升溫至90～95℃，保溫10～20min。

優(yōu)選的，上述步驟(4)中：納濾膜納濾的孔徑為1～2nm。

優(yōu)選的，上述步驟(4)中：冷凍干燥時，真空度為0.1～0.3mbar，溫度為-40～-50℃，時間為16～20h。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所達到的有益效果是：