[發(fā)明專利]一種擴增小鼠成體肺干細胞的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210837863.9
• 申請日: 2022-07-16
• 公開（公告）號: CN115896002A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發(fā)明（設計）人: 黃鵬羽;張兵芳
• 申請（專利權）人: 中國醫(yī)學科學院生物醫(yī)學工程研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 北京慕達星云知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 魏志恒

本發(fā)明公開了一種擴增小鼠成體肺干細胞的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。涉及原代肺干細胞培養(yǎng)技術領域。利用本發(fā)明培養(yǎng)基能夠連續(xù)穩(wěn)定培養(yǎng)小鼠成體肺干細胞30代以上，相比于國際上已有的培養(yǎng)體系，建立了更穩(wěn)定的肺干細胞長期體外擴增體系；肺干細胞經(jīng)連續(xù)傳代后能保持高增殖速率和多重分化潛能。

技術領域

本發(fā)明涉及原代肺干細胞培養(yǎng)技術領域，更具體的說是涉及一種擴增小鼠成體肺干細胞的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

背景技術

肺作為呼吸系統(tǒng)的主要部分，是動物進行氣體交換和免疫防御最重要的器官，極易受外界環(huán)境病菌或異物的侵害導致感染或受損。其功能的任何失調和異常都可能導致動物產(chǎn)生嚴重的呼吸疾病甚至死亡。研究發(fā)現(xiàn)，動物成年后，肺組織中仍駐留干細胞，在組織受損應激時，可被激活，增殖、分化為成熟的肺細胞，參與一定程度的組織損傷修復。但在特發(fā)性肺纖維化和新冠病毒感染導致的嚴重肺纖維化病例中，肺干細胞嚴重受損、丟失，肺組織發(fā)生不可逆轉的損傷，幾乎不在有細胞更新，導致晚期病例致死率極高(1.Hogan?Brigidl?M,Barkauskas?Christina?e,Chapman?Harold?a,et?al.2014.Repair?andRegeneration?of?the?Respiratory?System:Complexity,Plasticity,and?Mechanismsof?Lung?Stem?Cell?Function.Cell?stem?cell,15(2):123-138.2.Hou?Y?J,Okuda?K,Edwards?C?E,etal.2020.SARS-CoV-2Reverse?Genetics?Reveals?a?Variable?InfectionGradient?in?the?Respiratory?Tract.Cell,182(2):429-446.e414.)。鑒于肺干細胞在體內可自主分化為成熟的肺細胞，且干細胞治療在不同肺損傷的動物模型中已廣泛開展研究，并顯示良好的治療效果。因而，成體肺干細胞治療有望成為改善特發(fā)性肺纖維化和新型冠狀病毒感染導致的肺纖維化等呼吸疾病病癥最行之有效的方法之一。同時，肺干細胞可代替動物作為呼吸疾病靶向藥物篩選和療效評估的重要載體。

目前文獻報道，小鼠氣道區(qū)域的基底細胞可在2D培養(yǎng)條件下有效擴增15代，而肺遠端區(qū)域的肺泡前體細胞的體外培養(yǎng)必須依賴3D?Matrigel膠系統(tǒng)，尚不能進行2D體外培養(yǎng)。而Matrigel膠含有多種蛋白和生長因子，具體成分不明確，批次產(chǎn)品差異比較大，價格昂貴，考慮肺干細胞特性的維持及培養(yǎng)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，此系統(tǒng)不適宜體外大規(guī)模擴增培養(yǎng)。

因此，建立高效且長期穩(wěn)定擴增肺干細胞的2D培養(yǎng)體系，是呼吸疾病干細胞治療和藥物療效評估亟待解決的問題。

同時，對推進呼吸疾病干細胞治療、臨床藥物篩選、血管化肺類器官的構建和呼吸疾病致病機制的研究具有重要意義。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種擴增小鼠成體肺干細胞的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。培養(yǎng)基體系能夠連續(xù)穩(wěn)定培養(yǎng)小鼠成體肺干細胞30代以上，至第30代培養(yǎng)的成體肺干細胞仍保持良好的細胞形態(tài)和較高的增殖速率，同時維持較強的干細胞特性和分化潛能，經(jīng)分化誘導可分化為成熟的I肺泡細胞和II肺泡細胞，氣道棒狀細胞等多種成熟的肺細胞。對推進呼吸疾病干細胞治療、臨床藥物篩選、血管化肺類器官的構建和呼吸疾病致病機制的研究具有重要意義。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：