[發明專利]H5和H9亞型禽流感病毒雙重納米PCR檢測的引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202210837159.3
• 申請日: 2022-07-15
• 公開（公告）號: CN116083641A
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 謝芝勛;李孟;李丹;謝麗基;羅思思;張民秀;李小鳳;阮志華;謝志勤
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 南寧頌博遠信知識產權代理事務所(普通合伙) 45141
• 代理人: 蘭亞君

1.一種通過雙重納米PCR檢測H5和H9亞型禽流感病毒的引物組，包括引物H5-F、引物H5-R、引物H9-F、引物H9-R，其特征在于：所述引物H5-F的序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述引物H5-R的序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述引物H9-F的序列如SEQ?ID?NO.3所示，所述引物H9-R的序列如SEQ?ID?NO.4所示。

2.一種含有權利要求1所述引物組的試劑或試劑盒。

3.一種如權利要求1所述引物組在通過雙重納米PCR檢測H5和H9亞型禽流感病毒的方法。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)提取待測樣品的cDNA；

(2)建立雙重納米PCR反應體系，利用上述引物組進行雙重納米PCR反應；

(3)將PCR反應產物通過瓊脂糖凝膠電泳檢測，當樣品擴增出219bp和515bp條帶時，說明該樣品分別為H5和H9亞型禽流感病毒；當樣品只擴增出219bp條帶時，說明該樣品為H5Ny(y＝1-9)亞型禽流感病毒；當樣品只擴增出515bp時，說明該樣品為H9Nx(x＝1-9)亞型禽流感病毒。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(2)中雙重納米PCR反應體系為：2×Nano-QPCR?buffer12.5μL，Taq?DNA?polymerase(5U/μL)0.8μL，待測樣品cDNA模板2μL，引物H5-F和H5-R(20pmol/μL)加入量為1μL，引物H9-F和H9-R(25pmol/μL)加入量為0.6μL，加入ddH₂O補足至終體積至25μL。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：步驟(2)中雙重納米PCR反應條件為：94℃3min；進入94℃20s，46℃30s，72℃30s，共30個循環；然后再72℃延伸5min，最后4℃結束反應。

7.權利要求1所述引物組或含有該引物組的試劑盒在檢測H5和H9亞型禽流感病毒中的應用。