[發(fā)明專利]一種定量檢測(cè)KRAS基因突變的引物探針組合及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210835824.5
• 申請(qǐng)日: 2022-07-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116042818A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳雯雯;王紀(jì)東;陳永欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 陳小龍

1.一種定量檢測(cè)KRAS基因突變的引物探針組合，其特征在于，所述引物探針組合包括定量檢測(cè)KRAS基因突變的引物和探針；

所述探針包括KRAS基因的野生型探針、KRAS基因的G12D突變位點(diǎn)、G12S突變位點(diǎn)和G13D突變位點(diǎn)的突變探針；

所述KRAS基因的上游引物的核酸序列包括SEQ?ID?NO.1所示的序列，下游引物的核酸序列包括SEQ?ID?NO.2所示的序列；

所述KRAS基因的野生型探針的核酸序列包括SEQ?ID?NO.3所示的序列；

所述KRAS基因的G12D突變位點(diǎn)的突變探針的核酸序列包括SEQ?ID?NO.4所示的序列；

所述KRAS基因的G12S突變位點(diǎn)的突變探針的核酸序列包括SEQ?ID?NO.5所示的序列；

所述KRAS基因的G13D突變位點(diǎn)的突變探針的核酸序列包括SEQ?ID?NO.6所示的序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)KRAS基因突變的引物探針組合，其特征在于，所述探針的5’端標(biāo)記有熒光基團(tuán)，3’端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)；

優(yōu)選地，所述熒光基團(tuán)包括FAM、VIC、TET、JOE、HEX、TAMRA、ROX、CY5或Texas?Red；

優(yōu)選地，所述淬滅基團(tuán)包括MGB、TAMRA、DABCYL、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Eclipse。

3.權(quán)利要求1或2所述的定量檢測(cè)KRAS基因突變的引物探針組合在制備檢測(cè)KRAS基因突變的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

4.一種定量檢測(cè)KRAS基因突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1或2所述的定量檢測(cè)KRAS基因突變的引物探針組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的定量檢測(cè)KRAS基因突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR反應(yīng)液；

優(yōu)選地，所述PCR反應(yīng)液包括DNA聚合酶、Mg²⁺、dNTPs和水。

6.一種以非疾病診斷和/或治療為目的的定量檢測(cè)KRAS基因突變的方法，其特征在于，所述方法包括：

以待測(cè)樣本中的基因組為模板，利用權(quán)利要求1或2所述的定量檢測(cè)KRAS基因突變的引物探針組合進(jìn)行數(shù)字PCR，進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)，根據(jù)數(shù)字PCR結(jié)果進(jìn)行結(jié)果判讀。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的以非疾病診斷和/或治療為目的的定量檢測(cè)KRAS基因突變的方法，其特征在于，所述數(shù)字PCR的反應(yīng)條件為：

93～98℃預(yù)變性8～12min；

93～96℃、25～35sec，55～65℃、25～35sec，共45～55個(gè)循環(huán)。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的以非疾病診斷和/或治療為目的的定量檢測(cè)KRAS基因突變的方法，其特征在于，所述結(jié)果判讀包括對(duì)數(shù)字PCR反應(yīng)液滴進(jìn)行計(jì)數(shù)及量化熒光信號(hào)，計(jì)算靶標(biāo)突變豐度。

9.一種定量檢測(cè)KRAS基因突變的裝置，其特征在于，所述裝置包括檢測(cè)單元和分析單元；

所述檢測(cè)單元用于執(zhí)行包括：

以待測(cè)樣本中的基因組為模板，利用權(quán)利要求1或2所述的定量檢測(cè)KRAS基因突變的引物探針組合進(jìn)行數(shù)字PCR，進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)；

所述分析單元用于執(zhí)行包括：

根據(jù)數(shù)字PCR結(jié)果進(jìn)行結(jié)果判讀。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的定量檢測(cè)KRAS基因突變的裝置，其特征在于，所述數(shù)字PCR的反應(yīng)條件為：

93～98℃預(yù)變性8～12min；

93～96℃、25～35sec，55～65℃、25～35sec，共45～55個(gè)循環(huán)；

優(yōu)選地，所述結(jié)果判讀包括對(duì)數(shù)字PCR反應(yīng)液滴進(jìn)行計(jì)數(shù)及量化熒光信號(hào)，計(jì)算靶標(biāo)突變豐度。