[發明專利]脫細胞人羊膜的制備方法

在審

• 申請號: 202210835190.3
• 申請日: 2022-07-16
• 公開（公告）號: CN115105636A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 章詩瑤;張宇;榮耀星;于艷秋
• 申請（專利權）人: 沈陽匯智細胞產業技術創新研究院有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/60;A61L15/42;A61L15/40
• 代理公司: 沈陽冠君專利代理事務所(普通合伙) 21271
• 代理人: 金慧君

1.一種脫細胞人羊膜的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取新鮮的人羊膜，浸泡于初步消毒溶液中，對羊膜進行初步消毒，并抑制細菌生長；

(2)取出羊膜，用無菌水清洗，再用次氯酸鈉溶液清洗，再用無菌水清洗；

(3)將清洗后的羊膜浸入凍存溶液中，撈出置于濾紙上，充分展開，再覆蓋一層濾紙，反復凍融兩次；

(4)將反復凍融后的羊膜置于Triton X-100溶液中，搖床孵育，初步去除細胞；然后用PBS溶液震蕩清洗羊膜；

(5)將羊膜置于脂肪酶溶液中，搖床孵育，以充分去除上皮細胞及其他雜質，然后用PBS溶液震蕩清洗羊膜；

(6)將羊膜平鋪在硝酸纖維膜上，絨毛膜面朝向硝酸纖維膜，壓在鐵盤下，置于-40℃環境下冷凍10～15小時；

(7)將冷凍的羊膜冷凍干燥至含水量為5％～7％。

2.根據權利要求1所述的脫細胞人羊膜的制備方法，其特征在于：還包括步驟(8)：將干燥的羊膜裁剪，裝入塑料袋中真空密封，γ射線輻照滅菌。

3.根據權利要求1所述的脫細胞人羊膜的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中，初步消毒溶液為含有50μg/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素和2.5μg/ml兩性霉素的PBS溶液；浸泡時間為20分鐘。

4.根據權利要求1所述的脫細胞人羊膜的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中，無菌水清洗的次數為4次；每次清洗的時間為10分鐘；次氯酸鈉溶液的濃度為0.05％，清洗時間為10分鐘。

5.根據權利要求1所述的脫細胞人羊膜的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中，反復凍融兩次的具體操作為：置于-80℃環境下凍存1小時，然后置于37℃環境下融化0.5小時，再置于-80℃環境下凍存1小時，然后置于37℃環境下融化0.5小時。

6.根據權利要求1所述的脫細胞人羊膜的制備方法，其特征在于：所述步驟(4)中，1％的Triton X-100溶液的濃度為1％；清洗的時間為10分鐘；搖床的轉速為70～100rpm/min，孵育溫度為37℃，孵育時間為24小時。

7.根據權利要求1所述的脫細胞人羊膜的制備方法，其特征在于：所述步驟(5)中，脂肪酶為購自索萊寶生物科技公司的脂肪酶TYPE II L8070；脂肪酶溶液的濃度為1000U/L；搖床的轉速為70～100rpm/min，孵育溫度為37℃，孵育時間為24小時；清洗次數為3次，每次清洗的時間為10分鐘。

8.根據權利要求1所述的脫細胞人羊膜的制備方法，其特征在于：所述步驟(7)中，冷凍干燥的溫度和壓力為：-30℃、0.2Mbar。

9.利用權利要求1～8中任一項所述的方法制備得到的脫細胞人羊膜。

10.權利要求9所述的脫細胞人羊膜作為支架材料在傷口愈合、創面修復、皮膚移植中的應用。