[發明專利]一株枯草芽孢桿菌及其應用在審
| 申請號： | 202210834070.1 | 申請日： | 2022-07-14 |
| 公開（公告）號： | CN116004417A | 公開（公告）日： | 2023-04-25 |
| 發明（設計）人： | 柏文琴;鄭宏臣;譚明;鄭雯;付曉平;趙興亞 | 申請（專利權）人： | 中國科學院天津工業生物技術研究所 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N9/10;C12P19/56;C12P33/20;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京知文通達知識產權代理事務所(普通合伙) 16051 | 代理人： | 歐陽石文 |
| 地址： | 300450 天津*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 枯草 芽孢 桿菌 及其 應用 | ||
1.一種制備糖基轉移酶的方法，其特征在于，利用保藏編號為CGMCC?No.?19322的枯草芽孢桿菌制備。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，其通過發酵所述枯草芽孢桿菌得到發酵液，離心取上清液即可；優選地，進一步通過純化獲得更純的糖基轉移酶。
3.一種制備萊鮑迪苷E的方法，其特征在于，以甜菊糖和萊鮑迪苷A混合物為底物，以及UDP、蔗糖合酶、蔗糖和如權利要求1或2所述的糖基轉移酶構成反應體系，反應生成萊鮑迪苷E；或者以甜菊糖和萊鮑迪苷A混合物為底物，以及UDPG和如權利要求1或2所述的糖基轉移酶構成反應體系，反應生成萊鮑迪苷E；
優選地，反應pH值為5-10，更優選為7-9；
優選地，反應溫度為15-45℃，更優選為30-40℃；
優選地，UDP用量1mM-10mM，優選為2mM-8mM，更優選為3mM-6mM；
優選地，底物濃度(mg/ml)和酶活力(U/ml)比值為5:1；
優選地，反應時間5-20h，更優選為10-15h。
4.一種制備萊鮑迪苷D和萊鮑迪苷E混合物的方法，其特征在于，在如權利要求3所述方法中的反應體系的基礎上，延長反應時間以生成萊鮑迪苷E和萊鮑迪苷D的混合物，優選地反應時間15-50h，更優選為30-40h；
優選地，反應pH值為6-10，更優選為9-10；
優選地，反應溫度為25-45℃，更優選為30-40℃；
優選地，UDP用量1mM-10mM，優選為2mM-8mM，更優選為3mM-6mM；
底物濃度(mg/ml)和酶活力(U/ml)比值為2：1至30:1，優選為2：1到10：1，而綜合萊鮑迪苷E的產率，優選底物濃度與酶活力為5：1。
5.如權利要求3或4所述的方法，在反應到確定時間后加入甲醇終止反應；反應體系采用Tris-HCl緩沖液。
6.如權利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述甜菊糖和萊鮑迪苷A混合物是由甜菊葉提取制備得到的。
7.一種甜味劑的制備方法，其特征在于，由如權利要求5所述的方法反應后的混合物作為甜味劑。
8.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于，進一步純化獲得萊鮑迪苷E、萊鮑迪苷D的混合物以及未完全轉化的甜菊糖和萊鮑迪苷A構成混合物。
9.如權利要求7或8所述的方法制備得到的甜味劑。
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