[發明專利]一種用于單純皰疹病毒感染性疾病的基因治療藥物

在審

• 申請號: 202210833075.2
• 申請日: 2022-07-15
• 公開（公告）號: CN115927473A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 凌思凱;汪嘯淵
• 申請（專利權）人: 上海本導基因技術有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N9/22;C12N15/113;C12N15/49;C12N15/38;A61K48/00;A61P31/22
• 代理公司: 上海段和段律師事務所 31334
• 代理人: 祁春倪

1.一種用于靶向HSV病毒的慢病毒載體，其包裝質粒包括表達膜蛋白的質粒pMD.2G、表達含RNA結合蛋白的慢病毒GagPol長鏈蛋白的質粒、表達野生型慢病毒GagPol長鏈蛋白的質粒、表達Cas9?mRNA的質粒和表達gRNA的質粒；所述表達gRNA的質粒中，

將gRNA的骨架基因置于慢病毒載體的3’-LTR的區域，由啟動子啟動表達，對應的慢病毒載體記為VLP-CRISPR；

或將一個gRNA的骨架基因置于慢病毒載體的3’-LTR的區域，另一個gRNA的骨架基因置于5’-LTR和3’-LTR區域之間，由啟動非編碼短序列RNA的啟動子啟動表達，對應的慢病毒載體記為VLP-CRISPR-2gRNA。

2.根據權利要求1所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒載體，其特征在于，所述gRNA的骨架基因包括序列如SEQ?ID?NO.9所示的通用型gRNA或序列如SEQ?ID?NO.10所示的優化型Osp.gRNA。

3.根據權利要求1所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒載體，其特征在于，所述表達含RNA結合蛋白的慢病毒GagPol長鏈蛋白的質粒，是將RNA結合蛋白n個拷貝分別置于慢病毒GagPol長鏈蛋白N-端或C-端或者同時N-端和C-端；n為RNA結合蛋白所能達到的任意拷貝數。

4.根據權利要求3所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒載體，其特征在于，所述RNA結合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

5.根據權利要求1所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒載體，其特征在于，所述表達Cas9mRNA的質粒，是將RNA結合蛋白所識別的莖環結構的基因置于Cas9基因的5’-端或/和3’-端；莖環結構數量為所能達到的任意拷貝數；Cas9基因的5’-端或/和3’-端均可以加入1到幾個拷貝的核定位信號；所述莖環結構序列如SEQ?ID?NO.3所示。

6.根據權利要求5所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒載體，其特征在于，Cas9包括Sp.Cas9、Sa.Cas9、xCas9、SpG、SpRY、SpCas9-HF1中的任意一種或任意一種的變體。

7.一種用于單純皰疹病毒感染性疾病的基因治療藥物，其特征在于，利用如權利要求1-6中任一項所述的慢病毒載體遞送靶向HSV復制相關基因的gRNA，HSV復制相關的基因包括UL5、UL8、UL9、UL29、UL30、UL42、UL52。

8.根據權利要求7所述的基因治療藥物，其特征在于，將靶向HSV復制相關的基因中任意一個或者兩個基因的向導序列分別放到VLP-CRISPR或者VLP-CRISPR-2gRNA中gRNA骨架前端。

9.根據權利要求7所述的基因治療藥物，其特征在于，所述靶向HSV復制相關基因為UL29、UL8，得到慢病毒載體VLP-CRISPR-UL29/UL8。

10.根據權利要求7所述的基因治療藥物，其特征在于，所述靶向HSV復制相關基因為UL52、UL8，得到慢病毒載體VLP-CRISPR-UL52/UL8。