[發(fā)明專利]一種特征多肽及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210830207.6
• 申請(qǐng)日: 2022-07-15
• 公開（公告）號(hào): CN115710308A
• 公開（公告）日: 2023-02-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 焦陽(yáng);尹雪;林永強(qiáng);汪冰;崔偉亮;譚樂(lè)俊;解盈盈;周倩倩;穆向榮;徐興燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院
• 主分類號(hào): C07K14/46
• 分類號(hào): C07K14/46;G01N33/68;G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 濟(jì)南知來(lái)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37276
• 代理人: 曹麗

本發(fā)明涉及一種粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚共有特征多肽及其應(yīng)用和鑒別粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚的方法，屬于生物技術(shù)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚共有特征多肽，所述特征多肽的氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明提供的特征多肽針對(duì)粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚具有優(yōu)異的專屬性和穩(wěn)定性，特異性強(qiáng)，可用于粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚的鑒別，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚共有特征多肽及其應(yīng)用和鑒別粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚的方法。

背景技術(shù)

海龍是我國(guó)重要的動(dòng)物藥材，具有溫腎壯陽(yáng)、散結(jié)消腫的功效，用藥歷史悠久，基原眾多。中國(guó)藥典中規(guī)定海龍藥用基源為海龍科動(dòng)物刁海龍Solenognathus hardwickii(Gray)、擬海龍Syngnathoides biaculeatus(Bloch)或尖海龍Syngnathusa cusLinnaeus的干燥體。

海龍作為補(bǔ)益類藥材，市場(chǎng)需求逐年增加，由于目前海龍未能有效的實(shí)現(xiàn)人工養(yǎng)殖，海龍野生資源日益減少，多有以其他品種混淆或以次充好。目前，中國(guó)藥典中未收錄的不同來(lái)源的海龍銷售比例逐年增大，導(dǎo)致海龍藥材市場(chǎng)流通混亂。粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚由于捕撈量大，價(jià)格較低，是市場(chǎng)上常見的混為品種。并且這三個(gè)品種外觀性狀相似，市場(chǎng)上多混在一起進(jìn)行銷售。

目前海龍的種類鑒別和質(zhì)量控制方法主要有性狀鑒定法、HPLC指紋圖譜法和分子生物學(xué)法。性狀鑒定法一般要求海龍個(gè)體完整，且需要鑒定者具有豐富的經(jīng)驗(yàn)，該方法存在一定的主觀性；HPLC指紋圖譜法專屬性較低；分子生物學(xué)法具有高專屬性，但受限于樣品中遺傳物質(zhì)保存的完好程度，對(duì)于海龍藥酒、炮制品、提取物、蟲蛀霉變以及多個(gè)個(gè)體混雜的樣品，因提取DNA困難而無(wú)法順利實(shí)驗(yàn)。近年來(lái)，越來(lái)越多的方法和標(biāo)準(zhǔn)中使用特征肽段對(duì)天然藥物進(jìn)行鑒別或定量研究。各物種中所含的蛋白質(zhì)存在個(gè)別位點(diǎn)氨基酸的差別，可用適當(dāng)?shù)牡鞍酌笇⒉町愇稽c(diǎn)截取出來(lái)，作為具有標(biāo)識(shí)意義的多肽段，即特征肽段。特征肽段的檢測(cè)一般使用質(zhì)譜手段，無(wú)需考慮蛋白質(zhì)活性，制備方法簡(jiǎn)單且肽段性質(zhì)較為穩(wěn)定。現(xiàn)有的海龍鑒定的方法限制因素較多，無(wú)法在海龍粉末、炮制品、提取物等衍生制品中進(jìn)行應(yīng)用，海龍蛋白中的特征肽段，有潛力作為海龍物種鑒定的指標(biāo)成分。目前，各數(shù)據(jù)庫(kù)中均未收載粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚相關(guān)蛋白序列信息，無(wú)法通過(guò)蛋白序列比對(duì)獲得差異肽段，因此尚未有粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚特征多肽的相關(guān)記載。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚共有特征多肽及其應(yīng)用和鑒別粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚的方法。本發(fā)明提供的特征多肽針對(duì)粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚具有優(yōu)異的專屬性和穩(wěn)定性，特異性強(qiáng)，可用于海龍藥材種屬鑒別，具體為粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚的鑒別，具有良好的應(yīng)用前景。

本發(fā)明提供了一種粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚共有特征多肽，所述特征多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述特征多肽在鑒別粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚中的應(yīng)用。

優(yōu)選的是，所述鑒別使用質(zhì)譜法進(jìn)行，檢測(cè)離子對(duì)包括：SEQ ID NO.1質(zhì)荷比為m/z719.1→329.2的定量離子，質(zhì)荷比為m/z 719.1→797.4的定性離子。

本發(fā)明還提供了一種粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚的鑒別方法，采用SEQID NO.1所示的特征多肽作為對(duì)照品。

本發(fā)明還提供了一種基于上述技術(shù)方案所述的特征多肽鑒別粗吻海龍、長(zhǎng)粗吻海龍和葛氏海鐲魚的方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：將預(yù)處理的海龍?zhí)崛∫夯蝾A(yù)處理的海龍粉提取液分別與胰蛋白酶混合，得到混合液，將所述混合液與碳酸氫銨水溶液混合，酶解后過(guò)濾，取濾液，得到供試品溶液；