[發明專利]一種構建可通過藥物誘導Cas9蛋白表達的模型豬的方法在審
| 申請號： | 202210822307.4 | 申請日： | 2022-07-12 |
| 公開（公告）號： | CN115992176A | 公開（公告）日： | 2023-04-21 |
| 發明（設計）人： | 賴良學;王可品;金琴 | 申請（專利權）人： | 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/63;C12N15/55;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 王艷齋 |
| 地址： | 510530 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 構建 通過 藥物 誘導 cas9 蛋白 表達 模型 方法 | ||
1.一種構建可通過藥物誘導Cas9蛋白表達的模型豬的方法，其特征在于，所述方法包括：
將rtTA調控元件敲入豬細胞基因組Rosa26位點，將Cas9蛋白表達元件敲入豬細胞基因組Hipp11位點；
所述rtTA調控元件含有rtTA蛋白編碼基因；
所述Cas9蛋白表達元件含有TRE3G啟動子和Cas9蛋白編碼基因，所述TRE3G啟動子啟動Cas9蛋白編碼基因表達。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述rtTA調控元件敲入Rosa26位點的第一個內含子中。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述rtTA蛋白編碼基因的核酸序列包括SEQ?ID?NO.1所示的序列；
優選地，所述Cas9蛋白編碼基因包括SpCas9蛋白編碼基因；
優選地，所述SpCas9蛋白編碼基因的核酸序列包括SEQ?ID?NO.2所示的序列；
優選地，所述TRE3G啟動子的核酸序列包括SEQ?ID?NO.3所示的序列。
4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，所述rtTA調控元件還含有藥物篩選標記基因；
優選地，所述藥物篩選標記基因包括neo基因；
優選地，所述neo基因的核酸序列包括SEQ?ID?NO.4所示的序列；
優選地，所述rtTA調控元件的核酸序列包括SEQ?ID?NO.5所示的序列。
5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，所述Cas9蛋白表達元件還含有藥物篩選標記基因；
優選地，所述藥物篩選標記基因包括puro基因；
優選地，所述puro基因的核酸序列包括SEQ?ID?NO.6所示的序列。
6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述Cas9蛋白表達元件還含有報告基因；
優選地，所述報告基因包括tdTomato基因；
優選地，所述tdTomato基因的核酸序列包括SEQ?ID?NO.7所示的序列；
優選地，所述Cas9蛋白表達元件的核酸序列包括SEQ?ID?NO.8所示的序列。
7.權利要求1-6任一項所述的構建可通過藥物誘導Cas9蛋白表達的模型豬的方法在對豬進行基因編輯中的應用。
8.一種對豬進行基因編輯的方法，其特征在于，所述方法包括；
利用權利要求1-6任一項所述的構建可通過藥物誘導Cas9蛋白表達的模型豬的方法構建模型豬，將基因編輯元件導入所述模型豬的細胞中進行基因編輯。
9.根據權利要求8所述的對豬進行基因編輯的方法，其特征在于，所述基因編輯元件包括向導RNA和/或外源基因表達盒。
10.由權利要求1-6任一項所述的構建可通過藥物誘導Cas9蛋白表達的模型豬的方法或權利要求8或9所述的對豬進行基因編輯的方法構建的模型豬在藥物實驗和藥物篩選中的應用。
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