[發明專利]一種生物樣品中納呋拉啡的檢測方法

在審

• 申請號: 202210805489.4
• 申請日: 2022-07-08
• 公開（公告）號: CN115015440A
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 周曉雯;郝雷;劉歡;馬錚
• 申請（專利權）人: 江蘇杜瑞制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86;B01J20/281
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本發明提供了一種納呋拉啡的生物樣品分析方法，是通過高效、快速、靈敏的液相?質譜聯用系統(LC?MS/MS)方法對納呋拉啡進行分析。此方法采取了固相萃取法對生物樣本進行前處理，基于待測物與內標的峰面積比，通過歸一化法得到標準曲線，從而定量得到生物樣品中納呋拉啡的濃度。本發明采取了固相萃取法純化樣品，使得檢測限非常低，可達0.1pg/mL，本發明方法可專屬、靈敏、快速地測定生物樣品中納呋拉啡的濃度，為測定納呋拉啡在人或動物體內的藥代動力學中納呋拉啡的檢測提供了簡便的分析方法。

技術領域

本發明屬于藥物色譜、質譜分析領域，涉及化學品的檢測方法，具體涉及一種生物樣品中納呋拉啡的檢測方法。

背景技術

納呋拉啡，化學名：(2E)-N-[(5R,6R)-17-(環丙基甲基)-4,5-環氧-3,14-二羥基嗎啡喃-6-基]-3-(3-呋喃基)-N-甲基-丙烯酰胺鹽酸鹽，其化學結構式如下：

它是高選擇性к(kappa)-opioid受體激動劑，用于治療血液透析相關尿毒癥瘙癢。目前，臨床應用證明納呋拉啡耐受性良好，常見不良反應為中樞神經系統(失眠、瞌睡、眩暈和頭疼)和胃腸道系統(便秘、惡心和嘔吐)，所有的不良反應為暫時的，停藥后可恢復。目前，還沒有關于檢測納呋拉啡的方法，在此方面產生了技術空白。

發明內容

本發明針對目前對于納呋拉啡的檢驗方法方面的空白，提供一種檢測納呋拉啡的檢驗方法，該方法操作簡單，分析快速，而且能應用于多種不同的生物基質。

一種生物樣品中納呋拉啡的檢測方法，采用高效液相色譜-質譜聯用進行測定，其中，色譜條件：液相型號為SHIMADZU LC-20A或SHIMADZU LC-30A中任意一種型號的液相色譜；色譜柱為SHIMADZU Shim-pack GIST C18-AQ，2.1*50mm，3μm；流動相A相為0.1％甲酸水溶液，流動相B相為0.1％甲酸甲醇，梯度洗脫條件包括如下五個階段：

第一階段(0.00-0.80min)：起始流動相比例A:B＝90:10；

第二階段(0.80-1.50min)：流動相比例由A:B＝90:10B相緩慢上升至A:B＝30:70；

第三階段(1.50-2.60min)：流動相比例A:B＝30:70；

第四階段(2.60-2.61min)：流動相比例由A:B＝30:70B相迅速下降至A:B＝90:10；

第五階段(2.61-3.50min)：流動相比例A:B＝90:10；流速為：0.8mL/min；進樣量為：5-10μL。

質譜條件：AB SCIEX API 6500+或QTRAP 6500型號質譜，ESI源，正離子，離子噴射電壓為5500V，溫度550-600℃，霧化氣壓力為55psi，解簇電壓壓力為55psi，氣簾氣體壓力為35-40psi，掃描方式為多重反應監測(MRM)，納呋拉啡和內標的質譜參數為：

上表中，對于各術語的解釋說明如下：

Q1—母離子；Q3—子離子；Dwell time—駐留時間；DP—去簇電壓；EP—射入電壓；CE—碰撞能量；CXP—碰撞室射出電壓。

進一步的，所述固相萃取法的固相萃取小柱為：Phenomenex，Strata^TM-X(30mg，1cc³)。

一種生物樣品中納呋拉啡的檢測方法的前處理包括以下步驟：

1)先后使用1mL甲醇和1mL純水進行固相萃取小柱的活化；