[發(fā)明專利]一種液基細胞制片的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210801623.3
• 申請日: 2022-07-08
• 公開（公告）號: CN115112456A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設計）人: 張海娟;張金花;傅亮;白麗娜
• 申請（專利權）人: 山西尚寧高科技醫(yī)學檢驗中心（有限公司）
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 魯勇杰

本申請涉及一種液基細胞制片的方法，本申請中的方法通過在液基樣品的生理鹽水體系中加入苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯組成的混合物，通過離心作用，是雜質細胞與液基細胞實現(xiàn)有效的分離，從而可以避免這些雜質細胞的存在，影響液基細胞的觀察，提高檢測的效率和準確率。本申請中通過苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯的比例，可以控制液膜的形成，從而更好的實現(xiàn)雜質的去除。本申請中配置了細胞保存處理液，可以使液基細胞保持較好的形態(tài)，避免了細胞的萎縮和腫脹破裂等形態(tài)變化情況的發(fā)生，維持細胞的穩(wěn)定性，同時細胞保存處理液還可以實現(xiàn)細胞的固定，使細胞易染色，從而提高細胞制片的清晰度，便于后續(xù)的病理檢驗工作。

技術領域

本申請涉及細胞學檢測技術領域，尤其是涉及一種液基細胞制片的方法。

背景技術

宮頸癌是目前女性癌癥中最常見的惡性腫瘤之一。早期診斷宮頸癌及癌前病變是提高宮頸癌治愈率及患者生存率的關鍵，細胞學檢查是目前臨床應用最廣泛的篩查子宮頸癌的主要方法。它是以觀察細胞結構和形態(tài)變化來診斷臨床病癥的一門學科。幾十年來細胞學檢查已成為宮頸癌的大規(guī)模普查和高危人群隨訪觀察的主要方法，使中晚期宮頸癌發(fā)生率大幅度下降。細胞學檢查主要有巴氏涂片法和液基細胞檢測法，巴氏涂片法存在大量細胞的重疊以及雜質細胞過多，病理醫(yī)生在判讀時非常困難，因而其假陰性率。液基細胞檢測法其涂片細胞重疊少、無退變或退變輕微，背景干凈清晰，因而液基細胞學檢查的敏感性和特異性均優(yōu)于傳統(tǒng)巴氏涂片。

目前液基細胞檢測方法中，雖然可以避免大量細胞的重疊，但是仍舊無法解決標本內有大量紅細胞、白細胞和粘液問題，這些殘留的無效細胞和粘液不僅會影響觀察，還容易使有效的宮頸細胞丟失。為了去除紅細胞，白細胞和粘液，采用的方法主要有離心法和沖洗法，離心法可以基本去除粘液和白細胞，但是因為宮頸細胞與紅細胞的比重相差較小，因而雖然有分界線，但是兩者界線不清晰，實質上難以實現(xiàn)完全分離。沖洗法雖然能去除大部分紅細胞和白細胞，但也會損失部分宮頸細胞。

針對上述相關技術，發(fā)明人認為目前液基細胞檢測法中液基細胞紙片中存在著雜質細胞和粘液較多缺陷。

發(fā)明內容

為了進一步提高液基細胞檢查的精準度和效率，本申請?zhí)峁┮环N液基細胞制片的方法。

本申請?zhí)峁┑囊环N液基細胞制片的方法，采用如下的技術方案：

一種液基細胞制片的方法，包括以下步驟：

S1：將液基樣品放入到培養(yǎng)皿中，孵育后，切換至生理鹽水體系，然后向培養(yǎng)皿中加入苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯組成的混合物，離心，然后用生理鹽水沖洗掉上層的紅細胞、白細胞和粘液；再然后用吸走表層液膜，底層即為處理后的液基樣品；

S2：向步驟S1中處理后的液基樣品中加入細胞保存處理液，充分振蕩，對細胞進行定型，得到定型處理后的液基樣品；

S3：將步驟S2中定型處理后的液基樣品置于沉降倉中進行沉降，沉降后，去除上清液，然后進行巴氏染色，得到染色后的液基樣品；

S4：將步驟S3中染色后的液基樣品進入離心機的制片倉，通過離心作用，在病理玻片上形成均勻的細胞層，封片后，即可用于檢測。

通過采用上述技術方案，紅細胞的密度介于1.085～1.12之間，白細胞和粘液的密度是低于紅細胞的，而液基細胞(上皮細胞、頸管細胞和底層細胞)的密度在1.21～1.25之間，其各種細胞之間的密度是存在差異的；因而本申請中苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯組成的混合物，調節(jié)其比例使其密度介于紅細胞和液基細胞的密度之間，由于苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯都是疏水的，因而離心的過程中，其會形成4層，白細胞和粘液層、紅細胞層、苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯形成的液膜層和液基細胞層，此時用生理鹽水可以沖洗掉白細胞和粘液層以及紅細胞層，而液膜層疏水的，其覆蓋在液基細胞層上，可以保護液基細胞不被沖走。因為其液膜獨特的疏水性，會形成一層薄膜，因而沖洗完畢后，只需采用移液槍置于膜層上，輕輕吸附，即可將整張膜去除。因而本申請中的方法，可以將大量的紅細胞、白細胞以及粘液進行去除，避免這些雜質細胞的存在，影響液基細胞的觀察。