[發明專利]一種液基細胞制片的方法

在審

• 申請號: 202210801623.3
• 申請日: 2022-07-08
• 公開（公告）號: CN115112456A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 張海娟;張金花;傅亮;白麗娜
• 申請（專利權）人: 山西尚寧高科技醫學檢驗中心（有限公司）
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 魯勇杰

1.一種液基細胞制片的方法，包括以下步驟：

S1：將液基樣品放入到培養皿中，孵育后，切換至生理鹽水體系，然后向培養皿中加入苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯組成的混合物，離心，然后用生理鹽水沖洗掉上層的紅細胞、白細胞和粘液；再然后用吸走表層液膜，底層即為處理后的液基樣品；

S2：向步驟S1中處理后的液基樣品中加入細胞保存處理液，充分振蕩，對細胞進行定型，得到定型處理后的液基樣品；

S3：將步驟S2中定型處理后的液基樣品置于沉降倉中進行沉降，沉降后，去除上清液，然后進行巴氏染色，得到染色后的液基樣品；

S4：將步驟S3中染色后的液基樣品進入離心機的制片倉，通過離心作用，在病理玻片上形成均勻的細胞層，封片后，即可用于檢測。

2.根據權利要求1所述的液基細胞制片的方法，其特征在于，所述步驟S1中，苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯的質量比為(0.47~0.59):(0.41~0.53)；混合物的密度在1.14~1.17g/cm3；混合物配置時，是將甘油三苯酸甲酯加入到苯甲酸甲酯中，加熱至70~80℃，使甘油三苯酸甲酯充分溶解，得到均勻的混合物。

3.根據權利要求1所述的液基細胞制片的方法，其特征在于，所述步驟S1中，苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯組成的混合物加入量為液基樣品生理鹽水體系體積的0.2~0.3倍。

4.根據權利要求1所述的液基細胞制片的方法，其特征在于，所述步驟S1中，離心的轉速為1000~1200r/min；生理鹽水沖洗時間為4~5min。

5.根據權利要求1所述的液基細胞制片的方法，其特征在于，所述步驟S2中，每100mL細胞保存處理液，有以下組分組成：十二水磷酸氫二鈉：2.5~3.1g；二水磷酸二氫鈉：0.25~0.35g；乙醇20~30mL；甲醛 1~5mL；氯化鈉0.1~1g；二硫蘇糖醇0.2~0.4g；谷氨酰胺0.03~0.05g；葉酸0.1~0.2g；加蒸餾水補充至100mL。

6.根據權利要求5所述的液基細胞制片的方法，其特征在于，所述步驟S2中，處理后的液基樣品和細胞保存處理液的體積比為1:2~4。

7.根據權利要求1所述的液基細胞制片的方法，其特征在于，所述步驟S3中，巴氏染色的具體步驟為：向沉降后的液基樣本中加入95%無水乙醇固定15~20min，蒸餾水清洗4~5次，接著置于蘇木素染液中3~5min，清水沖洗2~3次，進行藍化，接著95%的乙醇進行漂洗，置于橙黃染液中1~10s,接著95%的乙醇進行漂洗，再接著100%的乙醇漂洗，然后置于EA50染料中3~5min，接著95%的乙醇進行漂洗2次,100%的乙醇漂洗，置于無水乙醇中2~3min，接著置于二甲苯中2min。

8.根據權利要求1所述的液基細胞制片的方法，其特征在于，所述步驟S4中，離心轉速為700~800r/min。