[發明專利]一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法

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• 申請號: 202210795097.4
• 申請日: 2022-07-07
• 公開（公告）號: CN114958625A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 鄭召霞;葛翠鳳;張衛;劉洪鵬;伍雄輝;孟曉妍
• 申請（專利權）人: 福安藥業集團煙臺只楚藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/04;C12R1/66
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，包括以下依次進行的步驟：

1) 取一支土曲霉甘油冷凍管，采用無菌劃線法接種至平板培養基上，然后培養，獲取單菌落；

2) 挑選單菌落至無菌試管中，然后加入已滅菌的氯化鈉溶液和無菌玻璃珠，然后振蕩粉碎；

3) 吸取菌懸液至斜面培養基上，將菌懸液涂布均勻，然后培養；

4) 向成熟后的菌種斜面加入無菌水，然后轉移至甘油溶液中，然后渦旋混勻，完成后制備成甘油菌懸液；

5) 分裝至冷凍管中；

6) 冷凍保存。

2.根據權利要求1所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，步驟1)中，平板培養基的配制方法為：配制1000mL培養基，加酵母提取物1g～3g，麥芽提取物5g～10g，蛋白胨2g～5g，甘油2g～5g，葡萄糖3g～6g，瓊脂20g-30g，然后調節pH至6.5±0.5，然后濕熱滅菌15分鐘～30分鐘，滅菌壓力為0.12±0.02MPa, 滅菌溫度為121℃～124℃。

3.根據權利要求2所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，酵母提取物為酵母粉和/或酵母浸膏。

4.根據權利要求1所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，步驟1)中，土曲霉在平板培養基上培養的溫度為25℃～30℃，培養時間為7天～12天。

5.根據權利要求1所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，步驟2)中，挑選單菌落的標準為：菌落中央為淺黃色至淺棕色，直徑2cm～3cm；

加入2mL已滅菌的質量百分數0.9%的氯化鈉溶液和3～4粒無菌玻璃珠。

6.根據權利要求1所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，步驟3)中，斜面培養基的配制方法為：配制1000mL培養基，加酵母提取物1g～3g，麥芽提取物5g～10g，蛋白胨2g～5g，甘油2g～5g，葡萄糖3g～6g，瓊脂20g-30g，然后調節pH至6.5±0.5，然后濕熱滅菌15分鐘～30分鐘，滅菌壓力為0.12±0.02MPa, 滅菌溫度為121℃～124℃；

吸取0.5mL菌懸液至60mL斜面培養基上。

7.根據權利要求1所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，步驟3)中，土曲霉在斜面培養基上培養的溫度為25℃～30℃，培養時間為7天～12天。

8.根據權利要求1所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，步驟4)中，每一支成熟的菌種斜面加20mL～30mL無菌水，甘油溶液的體積濃度為40％～60％，無菌水和甘油溶液的體積比為1:1。

9. 根據權利要求8所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，40%～60%的甘油溶液的配制方法為：向40mL～60mL甘油中，加入40mL～60mL純化水，然后濕熱滅菌15分鐘～30分鐘，滅菌壓力為0.12±0.02MPa, 滅菌溫度為121℃～124℃。

10.根據權利要求1所述的一種發酵生產洛伐他汀的土曲霉的培養與保存方法，其特征在于，步驟6)中，冷凍保存的溫度為-70℃～-90℃。